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重组脑膜炎球菌PorB蛋白对猪伪狂犬弱毒疫苗的免疫增强效力研究
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重组脑膜炎球菌PorB蛋白对猪伪狂犬弱毒疫苗的免疫增强效力研究
论文目录
摘要
第11-12页
ABSTRACT
第12-14页
英文缩词表
第14-15页
绪论
第15-16页
第一部分 文献综述
第16-34页
第一章 蛋白体佐剂研究进展
第16-20页
1.1 概述
第16-18页
1.1.1 1类外膜蛋白(PorA)
第16-17页
1.1.2 2/3类外膜蛋白(PorB)
第17-18页
1.1.3 4类外膜蛋白(Class4)
第18页
1.2 PorB蛋白作为疫苗佐剂的前景
第18-20页
第二章 猪伪狂犬病研究进展
第20-26页
1 猪伪狂犬病在我国的流行简介
第20-21页
2 伪狂犬疫苗研究进展
第21-24页
2.1 灭活疫苗
第21页
2.2 弱毒疫苗
第21页
2.3 基因工程缺失疫苗
第21-22页
2.4 亚单位疫苗
第22-23页
2.5 核酸疫苗
第23页
2.6 PRV为载体的重组疫苗
第23-24页
2.7 小结
第24页
3 PRV弱毒疫苗佐剂的研究进展
第24-25页
4 展望
第25-26页
参考文献
第26-34页
第二部分 试验部分
第34-80页
第一章 重组PorB蛋白的表达与纯化
第34-46页
1 实验材料
第34-35页
1.1 菌株和质粒
第34-35页
1.2 主要试剂及试剂盒
第35页
1.3 主要仪器设备和实验器材
第35页
2 方法与内容
第35-40页
2.1 PorB基因合成
第35页
2.2 PorB基因鉴定和重组质粒的构建和鉴定
第35-37页
2.2.1 目的基因胶回收
第35-36页
2.2.2 PCR产物与T载体的连接
第36页
2.2.3 pUC-T -PorB克隆载体的转化
第36页
2.2.4 pUC-T-PorB阳性克隆质粒的鉴定
第36-37页
2.3 pET-32a-PorB重组表达载体的构建与鉴定
第37-38页
2.4 重组蛋白的表达、鉴定与纯化
第38-40页
2.4.1 重组质粒的表达
第38-39页
2.4.2 PorB重组蛋白的免疫印迹检测
第39页
2.4.3 PorB重组蛋白的纯化
第39-40页
2.5 重组PorB蛋白脱内毒素
第40页
3 结果与分析
第40-43页
3.1 PorB基因的鉴定
第40页
3.2 pET-32a-PorB重组载体鉴定
第40-41页
3.3 PorB蛋白表达鉴定
第41-43页
3.3.1 重组PorB蛋白SDS-PAGE结果
第41-42页
3.3.2 重组PorB蛋白的可溶性鉴定结果
第42-43页
3.3.3 重组PorB蛋白的纯化结果
第43页
4 讨论
第43-45页
参考文献
第45-46页
第二章 重组PorB蛋白对3日龄仔猪滴鼻免疫增强效果初步研究
第46-54页
1 材料与方法
第46-48页
1.1 动物分组与免疫
第46-47页
1.2 黏膜冲洗液的收集
第47页
1.3 抗体检测
第47-48页
1.3.1 PRV抗体的ELISA检测
第47-48页
1.3.2 PRV中和抗体的检测
第48页
2 结果与分析
第48-50页
2.1. 3日龄仔猪滴鼻免疫后IgG水平
第48-49页
2.2. 3日龄仔猪滴鼻免疫后IgA水平
第49-50页
2.3. 3日龄仔猪滴鼻免疫后PRV中和抗体水平
第50页
3 讨论
第50-52页
参考文献
第52-54页
第三章 重组PorB蛋白对50日龄仔猪注射免疫PRV弱毒疫苗效果初步研究
第54-62页
1 材料与方法
第54-56页
1.1 动物分组与免疫
第54-55页
1.2 外周淋巴细胞的制备
第55页
1.3 体液免疫水平检测
第55页
1.3.1 PRV抗体IgG的ELISA检测
第55页
1.3.2 PRV中和抗体的检测
第55页
1.4 细胞免疫水平检测
第55-56页
1.4.1 猪外周血T细胞增殖实验
第55页
1.4.2 猪外周血各种细胞因子水平的检测
第55-56页
2 结果及分析
第56-58页
2.1 50日龄仔猪注射免疫后PRVgB抗体水平
第56页
2.2 50日龄仔猪注射免疫后PRV中和抗体水平
第56-57页
2.3 50日龄仔猪注射免疫后淋巴细胞增殖水平
第57页
2.4 50日龄仔猪注射免疫后细胞因子含量
第57-58页
3 讨论
第58-60页
参考文献
第60-62页
第四章 重组PorB蛋白在大肠杆菌中表达条件优化
第62-80页
1 材料与方法
第62-65页
1.1 IPTG诱导LB培养基常规表达条件优化
第62-64页
1.1.1 最适诱导温度的确定
第62-63页
1.1.2 最合适诱导时机的确定
第63页
1.1.3 诱导剂IPTG最合适浓度的确定
第63页
1.1.4 最合适诱导时间的确定
第63页
1.1.5 最合适诱导培养pH值
第63-64页
1.2 自动诱导培养基的使用及其优化
第64-65页
1.2.1 碳源优化
第65页
1.2.1.1 甘油浓度优化
第65页
1.2.1.2 葡萄糖浓度优化
第65页
1.2.1.3 乳糖浓度优化
第65页
1.2.2 氮源及磷酸盐浓度优化
第65页
2 结果及分析
第65-75页
2.1 常规表达条件优化结果与分析
第65-69页
2.1.1 最适诱导温度的确定
第66页
2.1.2 最佳诱导时机的确定
第66-67页
2.1.3 诱导剂IPTG最佳浓度的确定
第67-68页
2.1.4 最佳诱导时间的确定
第68页
2.1.5 最佳诱导培养pH值
第68-69页
2.2 自动诱导培养基的使用及其优化结果与分析
第69-75页
2.2.1 碳源优化结果与分析
第70-73页
2.2.3 氮源及磷酸盐浓度优化结果与分析
第73-75页
3 讨论
第75-78页
参考文献
第78-80页
结论
第80-82页
附录
第82-84页
致谢
第84-86页
个人简历
第86-88页
攻读学位期间发表的学术论文目录
第88页
本篇论文共
88
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