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重组脑膜炎球菌PorB蛋白对猪伪狂犬弱毒疫苗的免疫增强效力研究

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重组脑膜炎球菌PorB蛋白对猪伪狂犬弱毒疫苗的免疫增强效力研究
论文目录
 
摘要第11-12页
ABSTRACT第12-14页
英文缩词表第14-15页
绪论第15-16页
第一部分 文献综述第16-34页
第一章 蛋白体佐剂研究进展第16-20页
  1.1 概述第16-18页
    1.1.1 1类外膜蛋白(PorA)第16-17页
    1.1.2 2/3类外膜蛋白(PorB)第17-18页
    1.1.3 4类外膜蛋白(Class4)第18页
  1.2 PorB蛋白作为疫苗佐剂的前景第18-20页
第二章 猪伪狂犬病研究进展第20-26页
1 猪伪狂犬病在我国的流行简介第20-21页
2 伪狂犬疫苗研究进展第21-24页
  2.1 灭活疫苗第21页
  2.2 弱毒疫苗第21页
  2.3 基因工程缺失疫苗第21-22页
  2.4 亚单位疫苗第22-23页
  2.5 核酸疫苗第23页
  2.6 PRV为载体的重组疫苗第23-24页
  2.7 小结第24页
3 PRV弱毒疫苗佐剂的研究进展第24-25页
4 展望第25-26页
参考文献第26-34页
第二部分 试验部分第34-80页
第一章 重组PorB蛋白的表达与纯化第34-46页
1 实验材料第34-35页
  1.1 菌株和质粒第34-35页
  1.2 主要试剂及试剂盒第35页
  1.3 主要仪器设备和实验器材第35页
2 方法与内容第35-40页
  2.1 PorB基因合成第35页
  2.2 PorB基因鉴定和重组质粒的构建和鉴定第35-37页
    2.2.1 目的基因胶回收第35-36页
    2.2.2 PCR产物与T载体的连接第36页
    2.2.3 pUC-T -PorB克隆载体的转化第36页
    2.2.4 pUC-T-PorB阳性克隆质粒的鉴定第36-37页
  2.3 pET-32a-PorB重组表达载体的构建与鉴定第37-38页
  2.4 重组蛋白的表达、鉴定与纯化第38-40页
    2.4.1 重组质粒的表达第38-39页
    2.4.2 PorB重组蛋白的免疫印迹检测第39页
    2.4.3 PorB重组蛋白的纯化第39-40页
  2.5 重组PorB蛋白脱内毒素第40页
3 结果与分析第40-43页
  3.1 PorB基因的鉴定第40页
  3.2 pET-32a-PorB重组载体鉴定第40-41页
  3.3 PorB蛋白表达鉴定第41-43页
    3.3.1 重组PorB蛋白SDS-PAGE结果第41-42页
    3.3.2 重组PorB蛋白的可溶性鉴定结果第42-43页
    3.3.3 重组PorB蛋白的纯化结果第43页
4 讨论第43-45页
参考文献第45-46页
第二章 重组PorB蛋白对3日龄仔猪滴鼻免疫增强效果初步研究第46-54页
1 材料与方法第46-48页
  1.1 动物分组与免疫第46-47页
  1.2 黏膜冲洗液的收集第47页
  1.3 抗体检测第47-48页
    1.3.1 PRV抗体的ELISA检测第47-48页
    1.3.2 PRV中和抗体的检测第48页
2 结果与分析第48-50页
    2.1. 3日龄仔猪滴鼻免疫后IgG水平第48-49页
    2.2. 3日龄仔猪滴鼻免疫后IgA水平第49-50页
    2.3. 3日龄仔猪滴鼻免疫后PRV中和抗体水平第50页
3 讨论第50-52页
参考文献第52-54页
第三章 重组PorB蛋白对50日龄仔猪注射免疫PRV弱毒疫苗效果初步研究第54-62页
1 材料与方法第54-56页
  1.1 动物分组与免疫第54-55页
  1.2 外周淋巴细胞的制备第55页
  1.3 体液免疫水平检测第55页
    1.3.1 PRV抗体IgG的ELISA检测第55页
    1.3.2 PRV中和抗体的检测第55页
  1.4 细胞免疫水平检测第55-56页
    1.4.1 猪外周血T细胞增殖实验第55页
    1.4.2 猪外周血各种细胞因子水平的检测第55-56页
2 结果及分析第56-58页
  2.1 50日龄仔猪注射免疫后PRVgB抗体水平第56页
  2.2 50日龄仔猪注射免疫后PRV中和抗体水平第56-57页
  2.3 50日龄仔猪注射免疫后淋巴细胞增殖水平第57页
  2.4 50日龄仔猪注射免疫后细胞因子含量第57-58页
3 讨论第58-60页
参考文献第60-62页
第四章 重组PorB蛋白在大肠杆菌中表达条件优化第62-80页
1 材料与方法第62-65页
  1.1 IPTG诱导LB培养基常规表达条件优化第62-64页
    1.1.1 最适诱导温度的确定第62-63页
    1.1.2 最合适诱导时机的确定第63页
    1.1.3 诱导剂IPTG最合适浓度的确定第63页
    1.1.4 最合适诱导时间的确定第63页
    1.1.5 最合适诱导培养pH值第63-64页
  1.2 自动诱导培养基的使用及其优化第64-65页
    1.2.1 碳源优化第65页
      1.2.1.1 甘油浓度优化第65页
      1.2.1.2 葡萄糖浓度优化第65页
      1.2.1.3 乳糖浓度优化第65页
    1.2.2 氮源及磷酸盐浓度优化第65页
2 结果及分析第65-75页
  2.1 常规表达条件优化结果与分析第65-69页
    2.1.1 最适诱导温度的确定第66页
    2.1.2 最佳诱导时机的确定第66-67页
    2.1.3 诱导剂IPTG最佳浓度的确定第67-68页
    2.1.4 最佳诱导时间的确定第68页
    2.1.5 最佳诱导培养pH值第68-69页
  2.2 自动诱导培养基的使用及其优化结果与分析第69-75页
    2.2.1 碳源优化结果与分析第70-73页
    2.2.3 氮源及磷酸盐浓度优化结果与分析第73-75页
3 讨论第75-78页
参考文献第78-80页
结论第80-82页
附录第82-84页
致谢第84-86页
个人简历第86-88页
攻读学位期间发表的学术论文目录第88页

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