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伯克霍尔德菌脂肪酶LipA的底物多样性分析

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伯克霍尔德菌脂肪酶LipA的底物多样性分析
论文目录
 
中文摘要第1-4页
Abstract第4-6页
中文文摘第6-11页
绪论第11-19页
1 生物催化剂的底物多样性及多功能催化活性第11-12页
  1.1 底物多样性第11页
  1.2 多功能催化活性第11-12页
  1.3 底物多样性及多功能催化活性的开发及其具体应用第12页
2 微生物脂肪酶概述第12-14页
  2.1 微生物脂肪酶活性中心的结构特点及其分类第12-14页
  2.2 微生物脂肪酶催化底物的多样性第14页
3 微生物胆固醇酯酶第14-16页
  3.1 微生物胆固醇酯酶的应用第14-15页
  3.2 微生物胆固醇酯酶的结构特点第15-16页
  3.3 微生物脂肪酶与胆固醇酯酶的共性与差异第16页
4 本课题的研究背景、内容及意义第16-19页
第一章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA的纯化及脂肪酶基本酶学性质分析第19-43页
1 前言第19页
2 实验材料第19-23页
  2.1 试剂第19-20页
  2.2 重组菌株第20页
  2.3 培养基及主要溶液的配置第20-22页
  2.4 设备第22-23页
3 实验方法第23-30页
  3.1 重组脂肪酶基因lipA的诱导表达第23页
  3.2 脂肪酶LipA的纯化第23-24页
  3.3 脂肪酶酶活的测定第24-25页
  3.4 蛋白质含量的测定第25-27页
  3.5 LipA/LipB复合物分离条件的探索第27-28页
  3.6 重组脂肪酶LipA的酶学性质研究第28-30页
4 结果和分析第30-42页
  4.1 标准曲线的制作第30-31页
  4.2 重组脂肪酶LipA的纯化第31-33页
  4.3 LipA/LipB复合物分离条件的摸索第33-37页
  4.4 重组脂肪酶LipA的酶学性质第37-42页
5 小结与讨论第42-43页
第二章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA的底物多样性分析、对应分子模型的构建及潜在突变位点的预测第43-61页
1 前言第43页
2 实验材料第43-45页
  2.1 试剂第43-44页
  2.2 重组菌株第44页
  2.3 主要溶液的配置第44-45页
  2.4 设备第45页
3 实验方法第45-52页
  3.1 重组脂肪酶基因lipA的诱导表达第45页
  3.2 脂肪酶LipA的纯化第45页
  3.3 胆固醇酯酶酶活的测定第45-50页
  3.4 蛋白质含量的测定第50-51页
  3.5 脂肪酶-三酰甘油酯和脂肪酶-胆固醇酯过渡态复合物分子模型的构建第51页
  3.6 影响霍尔德菌脂肪酶LipA胆固醇酯酶活性的潜在突变位点的预测第51-52页
4 结果与分析第52-58页
  4.1 标准曲线的绘制第52-53页
  4.2 伯克霍尔德菌脂肪酶LipA胆固醇酯酶活性的测定第53-55页
  4.3 分子模型的构建第55-57页
  4.4 潜在突变位点的分析第57-58页
5 小结与讨论第58-61页
第三章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA突变体的构建及突变体活性的初步分析第61-75页
1 前言第61页
2 实验材料第61-63页
  2.1 试剂第61-62页
  2.2 菌株和质粒第62页
  2.3 培养基及主要溶液的配置第62-63页
  2.4 设备第63页
3 实验方法第63-69页
  3.1 SDS碱裂解法小量制备质粒pACYC-lpiA/lipB第63-64页
  3.2 用氯化钙制备感受态大肠杆菌E.coli BL21(DE3)第64页
  3.3 重叠延伸PCR以获得突变质粒第64-66页
  3.4 突变质粒的转化第66页
  3.5 突变质粒的阳性转化子的验证第66-68页
  3.6 突变体基因的诱导表达第68页
  3.7 重组脂肪酶LipA及其突变体的胆固醇酯酶酶活U/OD_(600)的测定第68-69页
4 结果和分析第69-74页
  4.1 重组质粒的的提取第69页
  4.2 重叠延伸PCR以获得突变质粒第69-70页
  4.3 突变质粒的转化第70页
  4.4 突变质粒的阳性转化子的验证第70-72页
  4.5 重组脂肪酶LipA及其突变体的胆固醇酯酶酶活U/OD_(600)的测定结果第72-74页
5 小结与讨论第74-75页
第四章 结论与后续工作第75-77页
1 结论第75-76页
2 后续工作第76-77页
参考文献第77-87页
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果第87-89页
致谢第89-91页
个人简历第91-95页

本篇论文共95页,点击这进入下载页面
 
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