论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-26页 |
| 1.1 真菌黑色素的研究 | 第12-14页 |
| 1.1.1 真菌黑色素简介 | 第12页 |
| 1.1.2 真菌黑色素的合成途径 | 第12-13页 |
| 1.1.3 真菌黑色素生物合成的生物学意义 | 第13-14页 |
| 1.2 桦褐孔菌黑色素的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.1 桦褐孔菌概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 桦褐孔菌可能存在一个新的黑色素合成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 桦褐孔菌可能经过非核糖体肽-聚酮途径合成水溶性黑色素 | 第16页 |
| 1.2.4 桦褐孔菌水溶性黑色素生物合成途径研究推测 | 第16-17页 |
| 1.2.5 桦褐孔菌NPM基因簇的概述 | 第17页 |
| 1.3 以构巢曲霉遗传操作体系研究桦褐孔菌NPM基因簇 | 第17-20页 |
| 1.3.1 构巢曲霉概述 | 第17页 |
| 1.3.2 研究策略 | 第17-20页 |
| 1.3.3 构巢曲霉遗传操作体系优势 | 第20页 |
| 1.4 以酿酒酵母遗传操作体系研究桦褐孔菌nrps-pks基因 | 第20-21页 |
| 1.4.1 酿酒酵母遗传操作体系概述 | 第20页 |
| 1.4.2 桦褐孔菌nrps-pks表达策略 | 第20-21页 |
| 1.4.3 优势及意义 | 第21页 |
| 1.5 利用乳酸乳球菌表达桦褐孔菌NPM基因簇中的HCP基因 | 第21-23页 |
| 1.5.1 乳酸乳球菌概述 | 第21页 |
| 1.5.2 HCP基因简介 | 第21-22页 |
| 1.5.3 研究策略及意义 | 第22-23页 |
| 1.6 NPM基因簇异源表达 | 第23-24页 |
| 1.6.1 菌株简介 | 第23页 |
| 1.6.2 表达策略 | 第23-24页 |
| 1.6.3 研究意义 | 第24页 |
| 1.7 本文的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.8 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 构巢曲霉NPM基因簇异源表达菌株的构建 | 第26-56页 |
| 2.1 材料 | 第26-32页 |
| 2.1.1 菌株 | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27-29页 |
| 2.1.4 溶液及培养基配方 | 第29-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-45页 |
| 2.2.1 桦褐孔菌液体培养及基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2 烟曲霉液体培养及基因组DNA提取 | 第33页 |
| 2.2.3 构巢曲霉液体培养及基因组DNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第34-38页 |
| 2.2.5 NPM基因簇分段扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.6 pyrG、pyroA、Riboflavin基因片段扩增 | 第39页 |
| 2.2.7 构巢曲霉wA侧翼片段扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.8 融合PCRDoublejointSecondRound反应体系 | 第40-41页 |
| 2.2.9 转化片段获取 | 第41-43页 |
| 2.2.10 转化并验证 | 第43-45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-54页 |
| 2.3.1 桦褐孔菌、烟曲霉及构巢曲霉基因组DNA | 第45-46页 |
| 2.3.2 NPM基因簇转化相关片段扩增及转化子PCR检测 | 第46-54页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第54-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 3 nrps-pks基因在酿酒酵母中分段表达载体及菌株的构建 | 第56-82页 |
| 3.1 材料 | 第56-60页 |
| 3.1.1 菌株 | 第56-57页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 3.1.4 溶液及培养基配方 | 第58-60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-75页 |
| 3.2.1 桦褐孔菌cDNA制备 | 第60-62页 |
| 3.2.2 目的基因克隆 | 第62-67页 |
| 3.2.3 转化及鉴定 | 第67-75页 |
| 3.3 结果与分析 | 第75-80页 |
| 3.3.1 nrps及nrps-pks扩增结果 | 第75页 |
| 3.3.2 pGEX-4T-1XmaI和NotI酶切结果 | 第75-76页 |
| 3.3.3 nrps及nrps-pks与pGEX-4T-1重组质粒检测 | 第76-77页 |
| 3.3.4 pXW55-ACPC载体NheI及PmlI单酶切结果 | 第77-78页 |
| 3.3.5 XW55-GST-nrps及XW55-GST-nrps-pks片段PCR扩增结果 | 第78页 |
| 3.3.6 pXW55-NheI-PmlI载体与GST-nrps及GST-nrps-pks片段重组质粒检测.. | 第78-79页 |
| 3.3.7 nrps-pks分段表达蛋白WesternBlot检测结果 | 第79-80页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第80页 |
| 3.5 本章小结 | 第80-82页 |
| 4 参与NPM基因簇表达产物跨膜转运的HCP基因表达载体及菌株的构建 | 第82-96页 |
| 4.1 材料 | 第82-84页 |
| 4.1.1 菌株 | 第82-83页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第83页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第83页 |
| 4.1.4 溶液及培养基配方 | 第83-84页 |
| 4.2 实验方法 | 第84-89页 |
| 4.2.1 HCP基因获取 | 第84-86页 |
| 4.2.2 HCP基因表达载体构建 | 第86-87页 |
| 4.2.3 乳酸乳球菌转化及鉴定 | 第87-88页 |
| 4.2.4 乳酸链球菌素诱导下的HCP基因表达 | 第88-89页 |
| 4.3 结果与分析 | 第89-93页 |
| 4.3.1 pUC57-HCP基因双酶切 | 第89-90页 |
| 4.3.2 pNZ8148双酶切检测 | 第90页 |
| 4.3.3 重组载体检测 | 第90-91页 |
| 4.3.4 重组菌株筛选 | 第91-92页 |
| 4.3.5 HCP基因的蛋白表达 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-96页 |
| 5 构巢曲霉wA位点转入NPM基因簇菌株的诱导表达 | 第96-106页 |
| 5.1 材料 | 第96-98页 |
| 5.1.1 菌株 | 第96-97页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第97页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第97页 |
| 5.1.4 溶液及培养基配方 | 第97-98页 |
| 5.2 实验方法 | 第98-100页 |
| 5.2.1 NPM基因簇整合到构巢曲霉wA位点的菌株活化 | 第98-99页 |
| 5.2.2 菌株诱导表达 | 第99-100页 |
| 5.3 结果与分析 | 第100-104页 |
| 5.3.1 NPM基因簇整合到构巢曲霉wA位点的菌株诱导结果 | 第100-101页 |
| 5.3.2 NPM基因簇构巢曲霉氨基酸诱导表达菌株半定量PCR结果 | 第101-102页 |
| 5.3.3 构巢曲霉wA位点转入pyrG的菌株诱导结果 | 第102-103页 |
| 5.3.4 桦褐孔菌在含有不同种类及浓度氨基酸的培养基上生长情况 | 第103-104页 |
| 5.4 讨论与分析 | 第104-105页 |
| 5.5 本章小结 | 第105-106页 |
| 6 结论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 作者简历 | 第116-118页 |
| 学位论文数据集 | 第118页 |
