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海豚链球菌胶体金快速检测方法的建立

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海豚链球菌胶体金快速检测方法的建立
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-10页
第1章 文献综述第10-17页
  1.1 海豚链球菌第10页
  1.2 海豚链球菌的检测方法第10-12页
    1.2.1 生理生化特性检测方法第11页
    1.2.2 基于分子生物学技术的检测法第11-12页
    1.2.3 基于免疫学技术的检测法第12页
    1.2.4 分子学与免疫学相结合的检测系统第12页
  1.3 可视化材料在检测中的应用第12-14页
    1.3.1 胶体金第12-13页
    1.3.2 荧光标记物第13页
    1.3.3 乳胶颗粒第13-14页
  1.4 LAMP与分子杂交技术第14-15页
    1.4.1 LAMP技术第14页
    1.4.2 分子杂交技术第14-15页
    1.4.3 LAMP-胶体金探针技术第15页
  1.5 免疫层析技术第15-16页
  1.6 本课题研究内容及意义第16-17页
第2章 海豚链球菌单克隆抗体的制备第17-35页
  2.1 引言第17页
  2.2 材料第17-18页
    2.2.1 菌株、细胞及实验动物第17页
    2.2.2 试剂、培养基及缓冲溶液第17-18页
  2.3 实验方法第18-27页
    2.3.1 免疫原的制备第18-19页
    2.3.2 小鼠操作手法第19页
    2.3.3 小鼠免疫第19-20页
    2.3.4 小鼠血清效价测定第20-21页
    2.3.5 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0的准备第21-22页
    2.3.6 细胞融合第22-23页
    2.3.7 融合细胞的培养及阳性筛选第23-24页
    2.3.8 杂交瘤细胞株的特异性筛选第24页
    2.3.9 杂交瘤细胞株的亚克隆第24页
    2.3.10 阳性细胞株的冻存第24-25页
    2.3.11 小鼠腹水制备第25页
    2.3.12 单克隆抗体的粗提和纯化第25页
    2.3.13 单克隆抗体浓度测定和浓缩第25-26页
    2.3.14 单克隆抗体的亚型鉴定第26页
    2.3.15 单克隆抗体的效价测定第26页
    2.3.16 单克隆抗体特性探究第26-27页
  2.4 实验结果与分析第27-33页
    2.4.1 小鼠免疫效果第27-28页
    2.4.2 细胞融合与筛选第28-30页
    2.4.3 单克隆抗体细胞株的鉴定第30-31页
    2.4.4 单克隆抗体效价测定第31页
    2.4.5 单抗亚型鉴定第31-32页
    2.4.6 单克隆抗体及其对应抗原表位大小确定第32-33页
  2.5 讨论第33-34页
  2.6 结论第34-35页
第3章 海豚链球菌胶体金免疫试纸条的制备第35-45页
  3.1 引言第35页
  3.2 材料第35页
  3.3 实验方法第35-39页
    3.3.1 胶体金的制备第35-36页
    3.3.2 胶体金标记单抗第36-37页
    3.3.3 试纸条的组装第37-38页
    3.3.4 试纸条灵敏度和特异性检测第38-39页
  3.4 实验结果分析第39-43页
    3.4.1 胶体金的制备第39页
    3.4.2 金标溶液制备第39-40页
    3.4.3 抗体配对实验第40-41页
    3.4.4 胶体金试纸条的灵敏度探究第41-42页
    3.4.5 试纸条的特异性探究第42-43页
  3.5 讨论第43-44页
  3.6 结论第44-45页
第4章 LAMP结合胶体金双探针杂交检测体系的建立第45-58页
  4.1 引言第45页
  4.2 材料第45页
  4.3 实验方法第45-50页
    4.3.1 菌株和DNA抽提第45-46页
    4.3.2 目的基因的选择第46页
    4.3.3 LAMP引物和双探针设计第46页
    4.3.4 LAMP反应第46-47页
    4.3.5 胶体金的制备第47页
    4.3.6 胶体双探针的标记第47页
    4.3.7 LAMP-胶体金双探针体系建立第47页
    4.3.8 LAMP-胶体金双探针检测体系优化第47-48页
    4.3.9 LAMP-胶体金双探针系统可行性验证第48页
    4.3.10 LAMP-胶体金双探针系统的灵敏度和特异性第48页
    4.3.11 海豚链球菌的其他方法的检测第48-49页
    4.3.12 对鱼样本的LAMP-胶体金双探针系统检测第49-50页
  4.4 实验结果第50-56页
    4.4.1 LAMP条件优化第50页
    4.4.2 胶体金的标记第50-51页
    4.4.3 LAMP-胶体金双探针检测系统的优化第51-52页
    4.4.4 LAMP-胶体金双探针系统可行性验证第52页
    4.4.5 LAMP-胶体金双探针系统灵敏度第52-53页
    4.4.6 海豚链球菌分离株的检测验证第53页
    4.4.7 LAMP-胶体金双探针系统特异性第53-54页
    4.4.8 其他方法检测限比较第54页
    4.4.9 斑马鱼组织的检测第54-56页
  4.5 讨论第56-57页
  4.6 结论第57-58页
第5章 结论、创新点与展望第58-60页
  5.1 结论第58页
    5.1.1 海豚链球菌单抗制备第58页
    5.1.2 海豚链球菌试纸条的制备第58页
    5.1.3 LAMP-胶体金双探针法第58页
  5.2 创新点第58-59页
  5.3 展望第59-60页
参考文献第60-67页
攻读硕士期间研究成果第67-68页
致谢第68页

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