论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第13-14页 |
| 1.2 bZIP转录因子研究动态 | 第14-19页 |
| 1.2.1 bZIP转录因子的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.2 bZIP转录因子的结构与功能 | 第14-16页 |
| 1.2.3 bZIP转录因子的分类及其功能 | 第16-19页 |
| 1.3 硝酸盐转运蛋白(NRT)的研究动态 | 第19-22页 |
| 1.3.1 硝酸盐转运蛋白NRT1.1基因家族的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.2 硝酸盐转运蛋白NRT2.1基因家族的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3 植物激素与氮素吸收的联系 | 第22页 |
| 1.4 研究的主要内容与技术路线 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究的主要内容 | 第22-23页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 慈竹bZIP和NRT基因的克隆及过表达载体构建 | 第24-36页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 相关试剂和主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.3 相关菌种、载体和序列 | 第25-26页 |
| 2.1.4 引物的设计及合成 | 第26页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第26-32页 |
| 2.2.1 慈竹RNA的提取及cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.2 慈竹BebZIP4、BebZIP6和BeNRT1基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收及连接 | 第28-29页 |
| 2.2.4 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| 2.2.5 菌体的培养与菌液PCR验证 | 第30页 |
| 2.2.6 质粒的提取与测序 | 第30页 |
| 2.2.7 过表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 慈竹BebZIP与BeNRT基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.2 慈竹BebZIP与BeNRT基因PCR扩增 | 第33页 |
| 2.3.3 慈竹BebZIP与BeNRT基因挑斑摇菌及菌液质粒PCR | 第33-34页 |
| 2.3.4 慈竹BebZIP与BeNRT基因的重组质粒酶切验证 | 第34页 |
| 2.3.5 慈竹BebZIP与BeNRT基因过表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.6 慈竹BebZIP与BeNRT基因的过表达载体酶切验证 | 第35页 |
| 2.4 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 慈竹BebZIP和BeNRT蛋白序列生物信息学分析 | 第36-47页 |
| 3.1 慈竹BebZIP4和BebZIP6蛋白序列生物信息学分析 | 第36-41页 |
| 3.1.1 bZIP类相关蛋白序列进化树的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.2 bZIP类相关蛋白的多序列比对 | 第38页 |
| 3.1.3 bZIP类相关蛋白的保守基序分析 | 第38-39页 |
| 3.1.4 BebZIP4和BebZIP6蛋白序列二、三级结构及亚细胞定位分析 | 第39-41页 |
| 3.2 慈竹BeNRT1蛋白序列生物信息学分析 | 第41-45页 |
| 3.2.1 NRT1类相关蛋白序列进化树的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.2 NRT1类相关蛋白的多序列比对 | 第42-43页 |
| 3.2.3 NRT1类相关蛋白的保守基序分析 | 第43-44页 |
| 3.2.4 BeNRT1蛋白二、三级结构及亚细胞定位分析 | 第44-45页 |
| 3.3 讨论与结论 | 第45-47页 |
| 第四章 慈竹BebZIP基因的酵母单杂交 | 第47-61页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| 4.1.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.2 试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 相关试剂及配制方法 | 第47-49页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第49页 |
| 4.2 方法 | 第49-55页 |
| 4.2.1 慈竹BebZIP4和BebZIP6基因酵母单杂交引物设计及合成 | 第49-50页 |
| 4.2.2 慈竹BebZIP4和BebZIP6基因全长(含酶切位点)扩增 | 第50-51页 |
| 4.2.3 慈竹BebZIP4和BebZIP6基因(含酶切位点)PCR产物的回收及其连接 | 第51-52页 |
| 4.2.4 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第52页 |
| 4.2.5 菌落蓝白斑筛选、扩大培养和质粒提取 | 第52页 |
| 4.2.6 pMD19-T-BebZIP4和pMD19-T-BebZIP6质粒及pEG202质粒双酶切 | 第52-53页 |
| 4.2.7 pMD19-T-BebZIP4和pMD19-T-BebZIP6质粒以及pEG202质粒双酶切产物电泳胶回收 | 第53页 |
| 4.2.8 酵母单杂交载体pEG202-BebZIP4和pEG202-BebZIP6的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.9 酵母单杂交阳性克隆的筛选及双酶切验证 | 第54页 |
| 4.2.10 酵母EGY48感受态的制备及酵母转化 | 第54-55页 |
| 4.2.11 酵母单杂交阳性克隆的鉴定 | 第55页 |
| 4.2.12 酵母单杂交 | 第55页 |
| 4.3 β-半乳糖苷酶(LacZ)酶活测定 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.4.1 用于酵母单杂交的BebZIP4和BebZIP6基因PCR扩增.. | 第56-57页 |
| 4.4.2 pEG202-BebZIP4和pEG202-BebZIP6质粒双酶切 | 第57-58页 |
| 4.4.3 转录自激活活性 | 第58-59页 |
| 4.4.4 β-半乳糖苷酶活性 | 第59-60页 |
| 4.5 讨论与结论 | 第60-61页 |
| 第五章 BebZIP转录因子的亚细胞定位 | 第61-69页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第61页 |
| 5.1.1 材料 | 第61页 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 | 第61页 |
| 5.2 方法 | 第61-66页 |
| 5.2.1 BebZIP4和BebZIP6基因的亚细胞定位全长序列设计 | 第61-62页 |
| 5.2.2 BebZIP4和BebZIP6基因的亚细胞定位序列扩增 | 第62页 |
| 5.2.3 亚细胞定位序列PCR产物胶回收及纯化 | 第62页 |
| 5.2.4 BebZIP4和BebZIP6基因的亚细胞定位胶回收产物分别与T载体连接 | 第62-63页 |
| 5.2.5 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第63页 |
| 5.2.6 菌落蓝白斑筛选、扩大培养和质粒提取及验证 | 第63页 |
| 5.2.7 pMD19-T-BebZIP4和pMD19-T-BebZIP6质粒以及pTEX-GFP质粒双酶切 | 第63-64页 |
| 5.2.8 pMD19-T-BebZIP4和pMD19-T-BebZIP6质粒双酶切产物分别与pTEX-GFP质粒双酶切产物的连接 | 第64-65页 |
| 5.2.9 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第65页 |
| 5.2.10 pTEX-BebZIP4-GFP和pTEX-BebZIP6-GFP大肠杆菌摇菌、菌液PCR以及双酶切 | 第65页 |
| 5.2.11 基因枪轰击法转化洋葱表皮细胞 | 第65-66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 5.3.1 用于亚细胞定位的BebZIP4和BebZIP6基因PCR扩增 | 第66页 |
| 5.3.2 pTEX-BebZIP4-GFP和pTEX-BebZIP6-GFP分别双酶切 | 第66-67页 |
| 5.3.3 亚细胞定位 | 第67-68页 |
| 5.4 结论 | 第68-69页 |
| 第六章 农杆菌介导法转化毛白杨以及基因枪法转化毛竹 | 第69-83页 |
| 6.1 农杆菌介导法转化毛白杨 | 第69-73页 |
| 6.1.1 仪器与材料 | 第69页 |
| 6.1.2 配方 | 第69-72页 |
| 6.1.3 菌液的活化及转基因植株的获得 | 第72-73页 |
| 6.2 毛白杨转基因植株阳性鉴定 | 第73-74页 |
| 6.2.1 抗性植株DNA的提取 | 第73页 |
| 6.2.2 抗性植株阳性鉴定 | 第73页 |
| 6.2.3 抗性植株半定量分析 | 第73-74页 |
| 6.3 转基因植株实时荧光定量PCR | 第74-75页 |
| 6.4 基因枪法遗传转化毛竹 | 第75页 |
| 6.4.1 基因枪法遗传转化 | 第75页 |
| 6.5 结果与分析 | 第75-81页 |
| 6.5.1 毛白杨抗性植株的获得及鉴定 | 第75-79页 |
| 6.5.2 转基因毛白杨植株半定量分析 | 第79-80页 |
| 6.5.3 转基因毛白杨实时荧光定量分析 | 第80-81页 |
| 6.5.4 毛竹转基因抗性植株的获得及鉴定 | 第81页 |
| 6.6 结论 | 第81-83页 |
| 第七章 转基因植株对胁迫的响应 | 第83-93页 |
| 7.1 转基因植株的干旱胁迫 | 第83页 |
| 7.1.1 仪器与材料 | 第83页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第83页 |
| 7.2 方法 | 第83-85页 |
| 7.2.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第84页 |
| 7.2.2 过氧化氢酶(CAT)活性测定 | 第84页 |
| 7.2.3 过氧化物酶(POD)活性测定 | 第84页 |
| 7.2.4 脯氨酸(Pro)含量的测定 | 第84-85页 |
| 7.2.5 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第85页 |
| 7.2.6 H_2O_2活体原位检测 | 第85页 |
| 7.3 结果与分析 | 第85-91页 |
| 7.3.1 超氧化物歧化酶活性分析 | 第85-86页 |
| 7.3.2 过氧化氢酶活性分析 | 第86-87页 |
| 7.3.3 过氧化物酶活性分析 | 第87-88页 |
| 7.3.4 脯氨酸含量分析 | 第88-89页 |
| 7.3.5 丙二醛含量分析 | 第89-90页 |
| 7.3.6 H_2O_2活体原位检测分析 | 第90-91页 |
| 7.4 转基因植株低氮胁迫 | 第91-92页 |
| 7.4.1 仪器与材料 | 第91页 |
| 7.4.2 主要试剂 | 第91页 |
| 7.4.3 方法 | 第91-92页 |
| 7.5 结果与分析 | 第92页 |
| 7.5.1 H_2O_2活体原位检测分析 | 第92页 |
| 7.6 结论 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-107页 |
| 附录1研究所用载体图 | 第107-109页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及研究成果 | 第109页 |
