论文目录 | |
缩略语表 | 第1-5
页 |
中文摘要 | 第5-8
页 |
英文摘要 | 第8-10
页 |
前言 | 第10-12
页 |
实验技术路线 | 第12-13
页 |
第一部分 CNTF突变体的设计 | 第13-22
页 |
材料与方法 | 第14-19
页 |
一、晶体结构及氨基酸序列的数据库检索 | 第14
页 |
二、三维结构的模建 | 第14-19
页 |
·hCNTFRα空间结构的模建 | 第14-15
页 |
·CNTF突变体的分子设计 | 第15-19
页 |
讨论 | 第19-21
页 |
小结 | 第21-22
页 |
第二部分 CNTF突变体的构建和表达 | 第22-36
页 |
一.实验材料 | 第22-23
页 |
二.实验方法 | 第23-29
页 |
·用PCR的方法获得CNTF突变体A和B的DNA | 第23
页 |
·pMD-18T/A及pMD-18T/B克隆质粒的构建 | 第23-24
页 |
·pThioHisA/A及pThioHisA/B表达质粒的构建 | 第24-25
页 |
·pThioHisA/A及pThioHisA/B在大肠杆菌BL21中的表达 | 第25-29
页 |
三.结果 | 第29-33
页 |
·CNTF突变体A和B的PCR扩增结果 | 第29
页 |
·pMD-18T/A及pMD-18T/B克隆质粒的构建 | 第29-31
页 |
·pThioHisA/A及pThioHisA/B表达质粒的构建 | 第31
页 |
·pThioHisA/A及pThioHisA/B在大肠杆菌BL21中的表达 | 第31-33
页 |
四.讨论 | 第33-35
页 |
五.小结 | 第35-36
页 |
第三部分 重组蛋白的复性及纯化工艺的建立 | 第36-56
页 |
一.实验材料 | 第36-37
页 |
二.实验方法 | 第37-41
页 |
A.实验室水平的研究 | 第37-38
页 |
B.中试水平的研究 | 第38-41
页 |
三.结果 | 第41-52
页 |
A.实验室水平的研究 | 第41-45
页 |
B.中试水平的研究 | 第45-52
页 |
四.讨论 | 第52-55
页 |
五.小结 | 第55-56
页 |
第四部分 CNTF突变体的理化性质及生物学活性检测 | 第56-89
页 |
一.实验材料 | 第56-57
页 |
二.实验方法 | 第57-61
页 |
·CNTF突变体蛋白理化性质的检测 | 第57-58
页 |
·生物学活性测定 | 第58-61
页 |
· 鸡胚背根神经节法 | 第58
页 |
· 细胞学活性检测 | 第58-59
页 |
· 正常小鼠减重法 | 第59-61
页 |
三.结果 | 第61-84
页 |
·理化性质检测 | 第61-68
页 |
·生物学活性检测 | 第68-84
页 |
· 鸡胚背根神经节法 | 第68-69
页 |
· 细胞学实验 | 第69-70
页 |
· 正常小鼠减重法 | 第70-84
页 |
四.讨论 | 第84-88
页 |
五.小结 | 第88-89
页 |
总结 | 第89-90
页 |
参考文献 | 第90-93
页 |
综述 肥胖症及其药物治疗的研究进展 | 第93-109
页 |
致谢 | 第109页 |