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胡萝卜抗冻蛋白AFP基因的克隆及对葡萄的遗传转化

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胡萝卜抗冻蛋白AFP基因的克隆及对葡萄的遗传转化
论文目录
 
摘要第1-3页
Abstract第3-5页
英文缩写符号及中英文对照表第5-6页
目录第6-9页
第一章 文献综述第9-22页
  1 植物的冻害及冻害机理第9-11页
    · 冻害第9-10页
    · 冻害机理第10-11页
  2 抗冻基因第11-14页
    · 抗冻蛋白的来源及鱼类抗冻蛋白(AFP)第11-12页
    · 鱼类 AFP 及在农业中的应用第12页
    · 植物抗冻蛋白第12-13页
      · 植物 AFPs 基因的发现第12-13页
      · 植物 AFP 基因在提高植物抗冻性方面的应用第13页
    · 抗冻相关基因第13-14页
      · 抗冻转录因子 CBF 家族的发现第13-14页
      · CBFs 与抗冻基因第14页
  3 葡萄遗传转化的研究第14-20页
    · 葡萄再生体系的研究第14-17页
      · 葡萄器官发生途径第15-16页
      · 胚状体发生途径第16-17页
    · 葡萄遗传转化途径的研究第17-20页
      · 根癌农杆菌介导 Ti 质粒介导基因转化葡萄第17-18页
      · 发根农杆菌转化葡萄第18-19页
      · 基因枪法转化葡萄第19页
      · 基因枪法和根癌农杆菌介导法相结合转化葡萄第19-20页
  4 本项目的研究目的和意义第20-21页
  5 技术路线第21-22页
第二章 材料与方法第22-34页
  1 材料第22-24页
    · 植物材料第22页
    · 菌种与质粒第22页
    · 酶与试剂第22页
    · PCR 引物的设计第22页
    · 培养基第22-23页
      · 细菌培养基第22-23页
    · 缓冲液第23-24页
  2 方法第24-28页
    · 抗冻基因 AFP 的克隆第24-25页
      · 胡萝卜基因组总 DNA 的提取方法(CTAB 法)第24-25页
      · 抗冻蛋白 AFP 基因的扩增第25页
    · 目的基因片段的回收第25页
    · 目的片段与 pGEm-T easy Vector 载体的连接第25-26页
    · 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第26-27页
      · 大肠杆菌感受态细胞的制备第26页
      · 大肠杆菌感受态细胞的转化第26-27页
    · 质粒 DNA 的提取第27页
    · 重组质粒的滞后鉴定第27页
    · 重组质粒的 PCR 鉴定第27-28页
    · 重组质粒的酶切鉴定体系第28页
    · 重组质粒的序列测序第28页
    · AFP 基因序列的生物信息学分析第28页
  3 抗冻基因 AFP 植物表达载体的构建第28-31页
    · 质粒的酶切第28-29页
    · 连接 AFP 和 pBI121 酶切产物第29页
    · 转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞第29-30页
    · 农杆菌感受态细胞的制备第30页
    · 中间载体直接导入农杆菌第30页
    · PCR 扩增第30-31页
  4 葡萄遗传转化第31-34页
    · 葡萄遗传转化再生体系的诱导第31-32页
      · 不同生长调节剂种类及浓度对葡萄遗传转化再生体系的影响第31页
      · 不同糖分处理的试管苗对葡萄遗传转化再生体系的影响第31页
      · 不同基因型对葡萄遗传转化再生体系的影响第31-32页
    · 不定芽增殖第32页
    · 根癌农杆菌介导胡萝卜 AFP 转化葡萄第32-34页
      · 卡那霉素筛选浓度确定第32页
      · 农杆菌浓度和时间对葡萄遗传转化的影响第32页
      · 羧苄青霉素敏感性试验第32页
      · 农杆菌叶盘法转化第32-33页
      · 转基因植株的 PCR 鉴定第33-34页
第三章 结果与分析第34-46页
  1 胡萝卜抗冻蛋白 AFP 基因克隆第34-39页
    · 胡萝卜总 DNA 的提取与目的片段的 PCR 扩增及回收第34-36页
      · 重组体的筛选第34页
      · 重组质粒的滞后鉴定第34-35页
      · 目的片段在重组质粒中的 PCR 鉴定第35页
      · 目的片段的酶切鉴定第35-36页
    · AFP 基因测序结果及核苷酸序列分析第36-37页
    · AFP 基因氨基酸序列同源性分析及分子进化分析第37-38页
    · 蛋白一级结构特征及理化性质分析第38-39页
    · 蛋白质二级结构预测第39页
  · AFP 抗冻基因载体构建第39-41页
    · pGEM-AFP 和 pBI121 酶切第40页
    · 植物表达载体的鉴定第40-41页
    · 中间载体导入农杆菌的鉴定第41页
      · 农杆菌的转化第41页
      · 农杆菌转化的鉴定第41页
  3 葡萄遗传转化第41-46页
    · 不同激素组合对葡萄再生体系的影响第41-44页
      · 不同糖分处理的葡萄试管苗对不定芽分化的影响第41-42页
      · 不同激素组合对葡萄再生体系的影响第42-43页
      · 不同基因型对葡萄再生体系的影响第43-44页
    · 葡萄转化第44-46页
      · 卡那霉素筛选浓度确定第44页
      · 菌液浓度和时间的选择第44页
      · 羧苄青霉素敏感性筛选第44-45页
      · 转化再生植株的 PCR 鉴定第45-46页
第四章 讨论第46-51页
  1 胡萝卜 AFP 基因的进化关系第46-47页
  2 中间表达载体构建策略第47页
  3 影响葡萄遗传转化的因素第47-51页
    · 外植体对再生体系的影响第47-48页
    · 激素的种类和浓度第48-49页
    · 影响葡萄转化的因素——菌液浓度和浸染时间第49页
    · 抗性标记基因的影响第49-51页
结论第51-52页
参考文献第52-59页
图版说明第59-60页
致谢第60-61页
个人简历第61-62页
导师简介第62-63页

本篇论文共63页,点击这进入下载页面
 
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