论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 引言 | 第11页 |
| · 蛋白质翻译后修饰研究概述 | 第11-17页 |
| · 蛋白质翻译后修饰的研究进展 | 第11-12页 |
| · 蛋白质翻译后修饰类型、机制及其功能 | 第12-13页 |
| · 乙酰化修饰研究进展 | 第13-17页 |
| · SOD 概述 | 第17-23页 |
| · SOD 的概念 | 第17-22页 |
| · 超氧化物歧化酶的研究进展 | 第22-23页 |
| · Fe-SOD 的研究现状及研究意义 | 第23页 |
| · 大肠杆菌基因敲除系统 | 第23-26页 |
| · Red 重组系统有关质粒 | 第24-25页 |
| · Red 同源重组的方法 | 第25-26页 |
| · 本论文研究的意义、目标和内容 | 第26-27页 |
| 第二章 大肠杆菌 SodB 蛋白的乙酰化研究 | 第27-49页 |
| 引言 | 第27页 |
| · 实验材料 | 第27-31页 |
| · 菌株与质粒 | 第27-28页 |
| · 培养基 | 第28页 |
| · 试剂 | 第28-29页 |
| · SDS-PAGE 凝胶溶液 | 第29页 |
| · 蛋白纯化缓冲液 | 第29-30页 |
| · Western 用缓冲液 | 第30页 |
| · 实验仪器 | 第30-31页 |
| · 实验方法 | 第31-39页 |
| · 大肠杆菌 W3110 基因组的提取 | 第31页 |
| · 大肠杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| · 从大肠杆菌基因组中扩增 sodA、sodB 及 sodC 基因 | 第31-32页 |
| · 大肠杆菌 sodA、sodB 及 sodC 基因的表达载体的构建 | 第32-34页 |
| · 大肠杆菌的转化 | 第34-35页 |
| · 重组质粒的筛选、验证 | 第35页 |
| · 菌种的保存 | 第35页 |
| · 蛋白质的诱导表达 | 第35页 |
| · 蛋白质的大量表达与纯化 | 第35-36页 |
| · SDS-PAGE 分析蛋白纯度及蛋白浓缩 | 第36-37页 |
| · 蛋白质浓度的测定及蛋白质的保藏 | 第37页 |
| · 免疫印迹(Western blot) 检测蛋白的乙酰化水平 | 第37-38页 |
| · 乙酰化蛋白的质谱鉴定 | 第38-39页 |
| · 结果与分析 | 第39-48页 |
| · SOD 蛋白序列的同源性比较分析i | 第39-41页 |
| · E. coli W3110 sodA、sodB及sodC基因的表达载体的构建 | 第41-43页 |
| · 大肠杆菌 SodA、SodB 及 SodC 蛋白的表达和纯化 | 第43-46页 |
| · 免疫印记（Western blot）分析大肠杆菌 SodA、SodB 及 SodC 蛋白的乙酰化 | 第46-47页 |
| · 质谱分析 SodB 蛋白的乙酰化位点 | 第47-48页 |
| · 讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 SodB 蛋白酶活测定及其去乙酰化研究 | 第49-60页 |
| 引言 | 第49页 |
| · 实验材料 | 第49-51页 |
| · 菌株与质粒 | 第49-50页 |
| · 培养基 | 第50页 |
| · 试剂 | 第50页 |
| · SDS-PAGE 凝胶溶液 | 第50页 |
| · 蛋白纯化缓冲液 | 第50页 |
| · Western 用缓冲液 | 第50页 |
| · SodB 酶活测定试剂 | 第50页 |
| · 实验仪器 | 第50-51页 |
| · 实验方法 | 第51-53页 |
| · SodB 蛋白和 CobB 蛋白的纯化 | 第51页 |
| · 邻苯三酚自氧化速率的测定 | 第51页 |
| · SodB 蛋白的酶活测定 | 第51-52页 |
| · 去乙酰化反应 | 第52页 |
| · SodB 蛋白被 CobB 蛋白去乙酰化反应后对酶活的影响 | 第52页 |
| · Far wesren 分析 SodB 和 CobB 蛋白之间的相互作用 | 第52-53页 |
| · ．结果与分析 | 第53-59页 |
| · 邻苯三酚自氧化速率的测定结果 | 第53页 |
| · SodB 蛋白酶活的测定 | 第53-55页 |
| · 大肠杆菌 CobB 蛋白催化 SodB 蛋白的去乙酰化 | 第55-56页 |
| · 大肠杆菌 SodB 蛋白去乙酰化反应前后的酶活测定 | 第56-58页 |
| · Far Western 分析 CobB 和 SodB 之间的相互作用 | 第58-59页 |
| · 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 大肠杆菌体内 SodB 蛋白乙酰化的研究 | 第60-71页 |
| 引言 | 第60页 |
| · 实验材料 | 第60-62页 |
| · 菌株与质粒 | 第60页 |
| · 培养基 | 第60-61页 |
| · 试剂 | 第61页 |
| · SDS-PAGE 凝胶溶液 | 第61页 |
| · 蛋白纯化缓冲液 | 第61页 |
| · Western 用缓冲液 | 第61页 |
| · 间接酶联免疫吸附(ELISA)用缓冲液 | 第61页 |
| · 实验器材 | 第61-62页 |
| · 试验方法 | 第62-66页 |
| · E. coli W3110 质粒的提取 | 第62页 |
| · E. coli W3110 sodB 基因敲除菌珠的构建 | 第62-65页 |
| · 细菌体内的 SodB 乙酰化水平分析 | 第65-66页 |
| · 结果与分析 | 第66-69页 |
| · E. coli W3110 sodB 敲除菌株的构建 | 第66-67页 |
| · E. coli W3110 体内的 SodB 乙酰化水平分析 | 第67-69页 |
| · 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
