论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5
页 |
| 英文摘要 | 第5-7
页 |
| 主要英文缩写词表 | 第7-9
页 |
| 目录 | 第9-12
页 |
| 前言 | 第12-39
页 |
| 一、流感概述 | 第12-18
页 |
| (一) 流感的流行病学特点 | 第12-13
页 |
| (二) 流感的主要症状和并发症 | 第13
页 |
| (三) 诊断 | 第13-14
页 |
| (四) 鉴别诊断 | 第14-15
页 |
| (五) 治疗 | 第15-16
页 |
| (六) 预防 | 第16-17
页 |
| (七) 流感的流行及监测 | 第17-18
页 |
| 二、流感病毒 | 第18-26
页 |
| (一) 流感病毒的发现 | 第18-19
页 |
| (二) 流感病毒的分类与命名 | 第19
页 |
| (三) 流感病毒基因组结构及其编码蛋白 | 第19-22
页 |
| (四) 流感病毒的复制 | 第22-24
页 |
| (五) 流感病毒抗原性的改变 | 第24-25
页 |
| (六) 流感病毒的理化特性 | 第25-26
页 |
| 三、HA基因特点 | 第26-30
页 |
| (一) HA基因序列 | 第26
页 |
| (二) HA编码的蛋白质 | 第26-27
页 |
| (三) HA蛋白的生物学功能 | 第27-28
页 |
| (四) HA与致病性的关系 | 第28-30
页 |
| 四、流感疫苗的研究进展 | 第30-38
页 |
| (一) 正在应用的流感疫苗 | 第30-31
页 |
| (二) 研制中的流感疫苗 | 第31-32
页 |
| (三) 核酸疫苗 | 第32-38
页 |
| 五、本课题研究的意义 | 第38-39
页 |
| 第一部分 材料与方法 | 第39-57
页 |
| 一、实验材料 | 第39-41
页 |
| 二、主要溶液的配制 | 第41-44
页 |
| 三、实验仪器 | 第44-45
页 |
| 四、实验方法 | 第45-57
页 |
| (一) HA基因序列的钓取 | 第45-48
页 |
| (二) 含有HA基因的真核表达载体的构建 | 第48-49
页 |
| (三) HA DNA疫苗的制备 | 第49-50
页 |
| (四) 重组真核表达质粒在HEK293细胞中的表达及鉴定 | 第50-53
页 |
| (五) PCR平台期的确定及PCR循环周期的选定 | 第53
页 |
| (六) HA基因的原核表达与HA蛋白的纯化 | 第53-55
页 |
| (七) HA蛋白多克隆抗体的制备 | 第55-57
页 |
| 第二部分 结果与分析 | 第57-70
页 |
| 一、HA基因序列的钓取及TA克隆 | 第57-58
页 |
| (一) HA基因的RT-PCR扩增结果 | 第57
页 |
| (二) PCR产物的TA克隆及鉴定 | 第57-58
页 |
| 二、含有HA基因的真核表达载体的构建 | 第58-59
页 |
| 三、HA DNA疫苗的制备 | 第59-61
页 |
| (一) 受体菌的筛选 | 第59-60
页 |
| (二) 重组质粒的大量制备 | 第60
页 |
| (三) 质量监控 | 第60-61
页 |
| 四、重组质粒在真核细胞中表达的鉴定结果 | 第61-63
页 |
| (一) RT-PCR法检测重组质粒在真核细胞中表达 | 第61-62
页 |
| (二) Western-Blot方法检测重组质粒在真核细胞中的表达 | 第62
页 |
| (三) 免疫荧光染色检测重组质粒在真核细胞中的表达 | 第62-63
页 |
| 五、PCR平台期的确定及PCR循环周期的选定 | 第63
页 |
| 六、HA基因的原核表达 | 第63-68
页 |
| (一) 含有HA基因的原核表达载体的构建 | 第63-65
页 |
| (二) pET-28a(+) /HA重组质粒的诱导表达 | 第65-66
页 |
| (三) 不同诱导表达时间对目的蛋白表达水平的影响 | 第66
页 |
| (四) pET-28a(+) /HA表达HA蛋白表达形式的鉴定 | 第66-67
页 |
| (五) HA蛋白的大量表达与纯化 | 第67-68
页 |
| (六) (His) 6/HA融合蛋白的定量 | 第68
页 |
| (七) HA蛋白的浓缩 | 第68
页 |
| 七、HA蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 | 第68-70
页 |
| 第三部分 讨论 | 第70-74
页 |
| 一、HA基因的克隆 | 第70
页 |
| 二、HA基因真核表达DNA疫苗的构建 | 第70-71
页 |
| 三、重组DNA疫苗在真核细胞中表达的检测 | 第71
页 |
| 四、质粒代谢实验 | 第71-72
页 |
| 五、HA蛋白的原核表达与纯化 | 第72
页 |
| 六、HA蛋白抗体制备 | 第72-74
页 |
| 第四部分 结论 | 第74-75
页 |
| 参考文献 | 第75-81
页 |
| 致谢 | 第81-82
页 |
| 作者简介 | 第82
页 |
