论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4
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| ABSTRACT | 第4-7
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| 第一章 绪论 | 第7-15
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| · 概述 | 第7
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| · IL2-HSA 融合蛋白简介 | 第7-9
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| · 人白介素-2 | 第7-8
页 |
| · IL-2 的生物学作用及临床应用 | 第8
页 |
| · 长效多肽药物的研究 | 第8
页 |
| · IL2-HSA 融合蛋白 | 第8-9
页 |
| · 蛋白多肽药物的分析方法 | 第9-10
页 |
| · 蛋白多肽类药物研究现状 | 第9
页 |
| · 蛋白质多肽药物分析方法 | 第9-10
页 |
| · 定量分析方法的方法学验证 | 第10
页 |
| · 酶联免疫分析方法 | 第10-13
页 |
| · 基本原理 | 第11
页 |
| · 基本类型 | 第11-12
页 |
| · ELISA 的应用 | 第12-13
页 |
| · 立题背景及研究内容 | 第13-15
页 |
| · 立题背景和目的 | 第13-14
页 |
| · 研究内容 | 第14-15
页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23
页 |
| · 材料 | 第15-17
页 |
| · 主要仪器及试剂 | 第15-16
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| · 菌株、细胞株及试验动物 | 第16
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| · 融合蛋白表达使用培养基[34] | 第16
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| · 融合蛋白活性测定使用培养基 | 第16
页 |
| · 缓冲液及试剂配制 | 第16-17
页 |
| · 方法 | 第17-23
页 |
| · P. pastoris GS115/pPIH 的发酵培养与诱导表达 | 第17
页 |
| · IL2-HSA 融合蛋白的分离纯化 | 第17
页 |
| · 蛋白质样品的SDS-PAGE 分析 | 第17-18
页 |
| · IL2-HSA 融合蛋白的Western blot 鉴定分析 | 第18-19
页 |
| · 蛋白质样品的定量分析 | 第19
页 |
| · 融合蛋白IL2-HSA 活性分析 | 第19-20
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 步骤 | 第20
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 实验条件的选择与优化[53-57] | 第20-21
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 检测IL2-HSA 融合蛋白标准曲线的制作 | 第21
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 检测 IL2-HSA 融合蛋白分析方法的考核[58-59] | 第21-22
页 |
| · IL2-HSA 融合蛋白的双抗体夹心ELISA 初步应用 | 第22-23
页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-41
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| · 纯化融合蛋白鉴定与纯度分析 | 第23
页 |
| · 纯化融合蛋白细胞活性测定结果 | 第23-26
页 |
| · 标准参考品中IL2-HSA 融合蛋白浓度的定量分析 | 第26
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 反应试验条件的选择与优化 | 第26-33
页 |
| · ELISA 固相载体的选择 | 第26-27
页 |
| · 酶标板均一性考察 | 第27-28
页 |
| · 包被抗体和酶标抗体的配对实验 | 第28
页 |
| · 包被抗体和酶标抗体工作浓度的选择 | 第28
页 |
| · 包被缓冲液及其pH 和盐离子浓度对包被效果的影响 | 第28-29
页 |
| · 包被温度及时间的选择 | 第29-30
页 |
| · 封闭剂的选择与优化 | 第30
页 |
| · 洗板条件的选择 | 第30-31
页 |
| · 标准曲线的制作 | 第31-33
页 |
| · 双抗体夹心ELISA 方法学考核 | 第33-37
页 |
| · 灵敏度 | 第33
页 |
| · 精密度 | 第33-34
页 |
| · 稳定性 | 第34-35
页 |
| · 特异性 | 第35
页 |
| · 回收率 | 第35-36
页 |
| · 健全性分析 | 第36-37
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| · ELISA 检测方法的初步应用 | 第37-41
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| · 发酵过程中融合蛋白的检测 | 第37-39
页 |
| · 纯化过程中融合蛋白的检测 | 第39
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| · 小鼠血清中融合蛋白的检测 | 第39-41
页 |
| 结论与展望 | 第41-43
页 |
| 主要结论 | 第41
页 |
| 展望 | 第41-43
页 |
| 致谢 | 第43-44
页 |
| 参考文献 | 第44-48
页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48
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