论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
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| ABSTRACT | 第7-13
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| 1 前言 | 第13-27
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| · C-反应蛋白研究进展 | 第13-17
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| · C-反应蛋白简介 | 第13
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| · C-反应蛋白的结构和功能 | 第13-14
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| · C-反应蛋白在医学上的应用 | 第14-15
页 |
| · C-反应蛋白的检测 | 第15-16
页 |
| · C-反应蛋白的检测在水产养殖方面的研究进展 | 第16-17
页 |
| · 鱼类的非特异性免疫系统 | 第17-19
页 |
| · 鱼类的体液免疫 | 第17
页 |
| · 鱼类的溶菌酶 | 第17-18
页 |
| · 鱼类的补体 | 第18
页 |
| · 鱼类的其他体液免疫 | 第18-19
页 |
| · 鱼类的免疫器官和组织 | 第19-20
页 |
| · 实时荧光定量PCR | 第20-24
页 |
| · 实时荧光定量PCR 检测技术原理 | 第20-23
页 |
| · 实时荧光定量PCR 技术的两种定量形式 | 第23-24
页 |
| · 固相亲和层析 | 第24-25
页 |
| · 载体的选择 | 第24-25
页 |
| · 配基的选择 | 第25
页 |
| · 本研究的目的意义 | 第25-27
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| 2 斜带石斑鱼-反应蛋白基因的克隆表达及序列分析 | 第27-48
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| · 实验材料 | 第27-31
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| · 斜带石斑鱼 | 第27
页 |
| · 载体与菌株 | 第27
页 |
| · 主要试剂 | 第27
页 |
| · 所用溶液配制 | 第27-31
页 |
| · 实验仪器 | 第31
页 |
| · 实验方法 | 第31-38
页 |
| · 斜带石斑鱼头肾组织总RNA 的提取 | 第31-32
页 |
| · 第一链cDNA 的合成（M-MLV Reverse Transcriptase，Takara） | 第32
页 |
| · 斜带石斑鱼CRP 基因(EC-CRP)的序列分析和原核表达 | 第32
页 |
| · 斜带石斑鱼CRP 基因(EC-CRP)的原核表达 | 第32-33
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34
页 |
| · 回收PCR 产物目的片段 | 第34
页 |
| · 构建重组质粒 | 第34-35
页 |
| · 重组表达质粒的构建 | 第35-36
页 |
| · 基因工程重组表达菌株的诱导表达 | 第36-38
页 |
| · 结果 | 第38-46
页 |
| · 斜带石斑鱼总RNA 的提取，cDNA 的反转录 | 第38-39
页 |
| · CRP 基因序列分析 | 第39-42
页 |
| · CRP 基因的扩增 | 第42-44
页 |
| · CRP 重组质粒的构建 | 第44
页 |
| · CRP 重组质粒的表达 | 第44-45
页 |
| · 不同温度下融合蛋白表达形式（包涵体或可溶性表达）的分析 | 第45-46
页 |
| · CRP-his 融合蛋白的纯化 | 第46
页 |
| · 讨论 | 第46-48
页 |
| 3 斜带石斑鱼CRP 基因的差异表达 | 第48-57
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| · 实验材料 | 第48-49
页 |
| · 斜带石斑鱼及处理 | 第48
页 |
| · 主要试剂及溶液配制 | 第48
页 |
| · 主要仪器 | 第48-49
页 |
| · 实验方法 | 第49-50
页 |
| · 斜带石斑鱼各组织总RNA 的提取 | 第49
页 |
| · 第一链cDNA 的合成（M-MLV Reverse Transcriptase，Takara） | 第49
页 |
| · 引物的设计 | 第49-50
页 |
| · 实时定量PCR（双内参法） | 第50
页 |
| · 结果 | 第50-54
页 |
| · 溶藻弧菌免疫斜带石斑鱼24h 后CRP 各组织表达差异 | 第50-51
页 |
| · 溶藻弧菌免疫斜带石斑鱼后各组织CRP 时间表达差异 | 第51-52
页 |
| · 10ppm 苯酚处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第52-53
页 |
| · 20ppm CdCl_2 处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第53
页 |
| · 2ppm CuSO_4 处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第53-54
页 |
| · 讨论 | 第54-57
页 |
| 4 斜带石斑鱼血清中CRP 的提取 | 第57-63
页 |
| · 实验材料 | 第57-58
页 |
| · 斜带石斑鱼 | 第57
页 |
| · 主要试剂及溶液的配制 | 第57
页 |
| · 实验仪器 | 第57-58
页 |
| · 实验方法 | 第58-59
页 |
| · 配基（PC）与凝胶的偶联 | 第58
页 |
| · 装柱 | 第58
页 |
| · 斜带石斑鱼血清样品的制备 | 第58
页 |
| · 亲和层析法提取斜带石斑鱼血清中的CRP | 第58-59
页 |
| · 测定CRP 天然蛋白溶液中CRP 的含量 | 第59
页 |
| · 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析CRP 融合蛋白与天然蛋白 | 第59
页 |
| · 结果 | 第59-61
页 |
| · PC-Sepharose 亲和层析柱 | 第59-60
页 |
| · Bradford 法蛋白定量标准曲线 | 第60-61
页 |
| · CRP 天然蛋白的提取 | 第61
页 |
| · 讨论 | 第61-63
页 |
| 5 兔抗斜带石斑鱼CRP 血清的制备 | 第63-72
页 |
| · 实验材料 | 第63-64
页 |
| · 实验动物 | 第63
页 |
| · 主要试剂 | 第63
页 |
| · 所用试剂和溶液的配制 | 第63-64
页 |
| · 实验仪器 | 第64
页 |
| · 实验方法 | 第64-66
页 |
| · 抗原的准备 | 第64
页 |
| · 取对照血清 | 第64-65
页 |
| · 兔抗 CRP 的制备 | 第65
页 |
| · 多克隆抗体的鉴定 | 第65-66
页 |
| · 结果 | 第66-70
页 |
| · CRP 天然蛋白与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第66-67
页 |
| · 兔抗CRP 天然蛋白血清与斜带石斑鱼血清琼脂双向扩散反应 | 第67
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| · CRP 表达蛋白与兔抗CRP 表达蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第67-68
页 |
| · CRP 表达蛋白与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第68-69
页 |
| · 三种抗原与兔抗CRP 表达蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第69-70
页 |
| · 红笛鲷血清与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第70
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| · ELISA 法测抗体效价 | 第70
页 |
| · 讨论 | 第70-72
页 |
| 6 结论 | 第72-73
页 |
| 参考文献 | 第73-79
页 |
| 致谢 | 第79-80
页 |
| 作者简历 | 第80-81
页 |
| 导师简介 | 第81页 |
