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兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达、纯化、活性鉴定及多克隆抗体制备
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兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达、纯化、活性鉴定及多克隆抗体制备
论文目录
 
目录第1-6 页
中文摘要第6-7 页
英文摘要第7-9 页
缩略语第9-11 页
一、引言第11-14 页
二、材料与方法第14-37 页
　　1 材料第14-17 页
　　　　· 动物:第14 页
　　　　· 主要仪器第14-15 页
　　　　· 主要试剂:第15-17 页
　　　　　　· 逆转录、cDNA克隆、载体构建试剂第15-16 页
　　　　　　· 蛋白分析试剂第16-17 页
　　　　　　· 高效液相色谱材料第17 页
　　2 方法第17-37 页
　　　　· 兔NRDR编码区cDNA克隆及载体构建第17-23 页
　　　　　　· 组织第17 页
　　　　　　· 提取兔肝总RNA第17-18 页
　　　　　　· 兔NRDR RNA逆转录成cDNA第18-19 页
　　　　　　· PCR扩增兔NRDR cDNA第19-20 页
　　　　　　· 胶回收目的片段第20 页
　　　　　　· 将目的片段连接至pGEM-T质粒第20-21 页
　　　　　　· 转化第21-22 页
　　　　　　· 重组质粒的初步筛选第22-23 页
　　　　　　· 测序确认第23 页
　　　　· 兔NRDR表达载体的构建第23-28 页
　　　　　　· 提取重组质粒第24-25 页
　　　　　　· 扩增出带attB重组位点的NRDR PCR片段第25-26 页
　　　　　　· 入门克隆的构建第26-27 页
　　　　　　· 入门克隆的筛选第27 页
　　　　　　· 表达克隆的构建第27-28 页
　　　　· 兔NRDR在BL21-AI~(TM)细胞中的表达及性质鉴定第28-33 页
　　　　　　· 试剂的配制第28-30 页
　　　　　　· 绘制蛋白浓度标准曲线第30-31 页
　　　　　　· 蛋白电泳第31 页
　　　　　　· 确定最佳表达时间第31 页
　　　　　　· 确定蛋白表达形式第31-32 页
　　　　　　· 通过westren-blot进一步确定蛋白表达形式第32 页
　　　　　　· 表达蛋白活性的测定第32-33 页
　　　　· 兔NRDR的纯化及Km值测定第33-35 页
　　　　　　· 表达蛋白的纯化第33-34 页
　　　　　　· 纯化蛋白Km值的测定第34-35 页
　　　　· 兔NRDR多克隆抗体的制备第35-37 页
三、结果第37-48 页
　　1 兔NRDR编码区cDNA的克隆及载体构建第37-39 页
　　　　· 总RNA浓度第37 页
　　　　· 全长cDNA的克隆第37 页
　　　　· NRDR全长序列载体的构建第37-38 页
　　　　· 测序确认NRDR全长序列第38-39 页
　　2 带兔NRDR编码区表达载体的构建第39-40 页
　　　　· 扩增出带attB重组位点的PCR产物第39 页
　　　　· 菌落PCR确认入门克隆第39-40 页
　　　　· 测序确认入门克隆第40 页
　　　　· 菌落PCR确认表达克隆第40 页
　　3 兔NRDR在BL21-AI~(TM)细胞中的表达第40-43 页
　　　　· 蛋白浓度标准曲线的建立第40-41 页
　　　　· 确认蛋白最佳表达时间第41 页
　　　　· 确认蛋白表达形式第41-42 页
　　　　· 表达蛋白的活性测定第42-43 页
　　4 兔NRDR原核表达蛋白的纯化及Km值测定第43-46 页
　　　　· 表达蛋白的纯化第43-44 页
　　　　· 表达蛋白纯化效率第44 页
　　　　· 纯化蛋白活性测定第44-46 页
　　　　　　· 视黄醇、视黄醛浓度-HPLC峰面积标准曲线的建立第44 页
　　　　　　· Km值测定第44-46 页
　　5 豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体的制备第46-48 页
　　　　· 豚鼠血清抗体滴度分析第46 页
　　　　· Western-Blot分析第46-48 页
四、讨论第48-51 页
五、结论第51-52 页
六、参考文献第52-58 页
七、致谢第58页

本篇论文共58页，点击这进入下载页面。
 
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