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锚定IBDV-VP2蛋白重组乳酸菌构建及其免疫效果评价

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锚定IBDV-VP2蛋白重组乳酸菌构建及其免疫效果评价
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-8页
主要缩写词第9-14页
引言第14-15页
第一章 文献综述第15-23页
    1.1 鸡传染性法氏囊病毒第15-17页
        1.1.1 IBD的流行病学第15页
        1.1.2 鸡传染性法氏囊病临床症状第15页
        1.1.3 鸡传染性法氏囊病防控第15-16页
        1.1.4 鸡传染性法氏囊病相关疫苗的研究第16-17页
    1.2 黏膜免疫第17-18页
    1.3 乳酸菌概述第18页
        1.3.1 乳酸菌的定义、分类及分布第18页
        1.3.2 乳酸菌的益生特性第18页
    1.4 递呈活载体乳酸菌的研究第18-20页
        1.4.1 表达外源蛋白的方法第18-19页
        1.4.2 重组乳酸菌诱导机体免疫应答的机制第19-20页
    1.5 锚定蛋白AcmA概述第20页
    1.6 母源抗体概述第20-23页
第二章 试验研究第23-70页
    试验一 r-L.Lactis-Usp_(45)-VP_2-RCK-AcmA_2的构建及免疫效果的评价第23-38页
        1.材料与方法第23-32页
            1.1 材料第23-25页
                1.1.1 实验材料第23页
                1.1.2 实验仪器第23-24页
                1.1.3 实验试剂第24-25页
            1.2 方法第25-32页
                1.2.1 引物的设计与合成第25页
                1.2.2 目的片段的扩增第25-26页
                1.2.3 目的基因的回收第26页
                1.2.4 NZ3900菌株感受态细胞的制备第26页
                1.2.5 提取pNZ8149质粒第26-27页
                1.2.6 载体重组构建第27-28页
                1.2.7 电转化重组质粒构建重组乳酸菌第28页
                1.2.8 重组菌株的筛选与鉴定第28-29页
                1.2.9 重组乳酸乳球菌的诱导第29页
                1.2.10 细胞壁上的蛋白提取第29页
                1.2.11 流式细胞仪分析重组乳酸菌的阳性率第29页
                1.2.12 融合蛋白表达含量的测定第29-30页
                1.2.13 融合蛋白稳定性检测第30页
                1.2.14 动物实验设计第30页
                1.2.15 血清抗体滴度的检测第30-31页
                1.2.16 中和抗体(血清)检测第31页
                1.2.17 黏膜sIgA抗体滴度的检测第31-32页
                1.2.19 统计分析第32页
        2 结果第32-36页
            2.1 目的基因片段第32页
            2.2 重组菌株的筛选与鉴定第32-33页
            2.3 重组菌株诱导表达的结果第33页
            2.4 流式细胞仪分析重组乳酸菌的阳性率第33-34页
            2.5 融合蛋白表达含量的检测第34页
            2.6 重组乳酸菌表达融合蛋白的稳定性检测第34-35页
            2.7 ELISA抗体和中和抗体的检测结果第35页
            2.8 黏膜sIgA抗体滴度的检测结果第35-36页
            2.9 攻毒保护率第36页
        3.讨论第36-37页
        4.小结第37-38页
    试验二 优化OmpH主动递呈重组乳酸菌活载体平台第38-52页
        1.材料与方法第38-44页
            1.1 材料第38-40页
                1.1.1 实验材料第38页
                1.1.2 实验仪器第38-39页
                1.1.3 实验试剂第39-40页
            1.2 方法第40-44页
                1.2.1 引物设计第40页
                1.2.2 目的片段的扩增第40-41页
                1.2.3 目的基因PCR产物的纯化回收第41页
                1.2.4 构建重组载体第41-42页
                1.2.5 重组质粒电转化构建重组乳酸菌第42页
                1.2.6 重组菌株的筛选与鉴定第42-43页
                1.2.7 重组乳酸乳球菌的诱导第43页
                1.2.8 融合蛋白表达含量的测定第43页
                1.2.9 融合蛋白稳定性检测第43页
                1.2.10 正交实验法在优化重组乳酸乳球菌诱导表达中的应用第43-44页
        2.结果第44-49页
            2.1 目的基因片段的扩增第44-45页
            2.2 重组菌株的筛选与鉴定第45-46页
            2.3 重组菌株的诱导表达第46页
            2.4 融合蛋白表达含量的检测第46-48页
            2.5 融合蛋白的稳定性检测第48-49页
            2.6 重组乳酸乳球菌株表达蛋白的正交实验结果第49页
        3.讨论第49-50页
        4.小结第50-52页
    试验三 高水平母源抗体下重组乳酸菌r-L.Lactis-VP_2-RCK的免疫效果第52-70页
        1.材料与方法第52-57页
            1.1 材料第52-54页
                1.1.1 实验材料第52页
                1.1.2 实验仪器第52-53页
                1.1.3 实验试剂第53-54页
            1.2 方法第54-57页
                1.2.1 重组菌株的诱导及表达第54页
                1.2.2 母源抗体衰减规律的检测第54页
                1.2.3 动物实验设计第54页
                1.2.4 血清抗体滴度的检测第54-55页
                1.2.5 血清中和抗体滴度的检测第55页
                1.2.8 RNA提取和反转录第55页
                1.2.9 相对荧光定量PCR检测第55-56页
                1.2.10 淋巴细胞数量检测第56-57页
        2.结果第57-68页
            2.1 重组菌株表达第57页
            2.2 母源抗体衰减规律第57-58页
            2.3 中和抗体的检测结果第58-59页
            2.4 法氏囊囊体比第59-60页
            2.5 法氏囊中细胞因子在mRNA水平的差异表达第60-61页
            2.6 胸腺中细胞因子在mRNA水平的差异第61-62页
            2.7 脾脏中细胞因子在mRNA水平的差异表达第62-63页
            2.8 外周血淋巴细胞CD4~+/CD8~+分析结果第63-66页
            2.9 脾细胞CD4~+/CD8~+分析结果第66-68页
        3.讨论第68-69页
        4.小结第69-70页
全文结论第70-71页
创新点第71-72页
参考文献第72-79页
致谢第79-80页
作者简介第80-81页
导师评阅表第81

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