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小鼠IL-33的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与应用研究

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小鼠IL-33的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与应用研究
论文目录
 
中文摘要第10-12页
Abstract第12-14页
缩略词表第14-16页
前言第16-25页
  1 IL-33 发现与命名第16页
  2 IL-33 的分子结构和编码蛋白第16页
  3 IL-33 产生及调节第16-17页
  4 IL-33 受体及信号传导第17-18页
    · 受体基因结构及表达第17页
    · 受体蛋白结构第17-18页
    · 信号转导途径第18页
  5 IL-33 生物学活性及其在相关疾病中的作用第18-20页
  6 本研究的目的和内容第20页
  参考文献第20-25页
第1章 小鼠IL-33 基因的克隆及序列分析第25-38页
  1 材料与方法第25-32页
    · 材料第25-27页
      · 质粒、菌株和实验动物第25页
      · 主要试剂第25页
      · 主要仪器第25-26页
      · 培养基第26页
      · 主要溶液第26-27页
      · RNA操作有关溶液的配置和处理第27页
      · RNA操作有关器皿的处理第27页
    · 方法第27-32页
      · 引物设计与合成第27-28页
      · 小鼠脊髓总RNA提取第28-29页
      · RT-PCR扩增第29页
      · 胶回收纯化目的基因片段第29页
      · PCR产物的克隆连接第29-30页
      · 感受态细胞的制备第30页
      · 转化第30-31页
      · 表达载体的构建第31页
      · 菌落PCR鉴定第31-32页
      · 重组质粒的小量快速制备及酶切法鉴定第32页
      · 重组质粒的序列分析第32页
  2 结果第32-35页
    · 小鼠脊髓总RNA制备及RT-PCR扩增第32页
    · 质粒构建第32-33页
    · 菌落PCR鉴定第33页
    · 重组质粒的酶切法鉴定第33-35页
    · 重组质粒的序列分析第35页
  3 讨论第35-36页
  参考文献第36-38页
第2章 小鼠IL-33 的原核表达、纯化与鉴定第38-49页
  1 材料与方法第38-43页
    · 材料第38-41页
      · 质粒与细胞第38页
      · 主要试剂第38-39页
      · 主要仪器第39页
      · 主要溶液第39-41页
    · 方法第41-43页
      · 引物设计与合成第41页
      · mIL-33 成熟蛋白基因的PCR扩增第41页
      · 表达载体的构建第41页
      · 工程菌的诱导表达第41-42页
      · 重组蛋白mIL-33 可溶性分析第42页
      · 重组蛋白的分离纯化第42页
      · 目的蛋白的含量与SDS-PAGE分析第42页
      · Western blot分析第42-43页
      · mIL-33 的生物学活性分析第43页
  2 结果第43-46页
    · 表达载体的构建第43-44页
    · 融合蛋白的诱导表达第44页
    · 重组蛋白的纯化第44-45页
    · 重组蛋白的鉴定第45页
    · m IL-33 的活性分析第45-46页
  3 讨论第46-47页
  参考文献第47-49页
第3章 兔抗小鼠IL-33 多克隆抗体的制备、纯化及鉴定第49-58页
  1 材料与方法第49-53页
    · 材料第49-50页
      · 实验动物第49页
      · 主要试剂第49页
      · 主要仪器及设备第49页
      · 主要溶液第49-50页
    · 方法第50-53页
      · 小鼠IL-33 蛋白的原核表达、纯化及鉴定第50-51页
      · 抗血清的制备第51页
      · ELISA检测抗血清效价第51页
      · 多克隆抗体的纯化第51-52页
      · 免疫印迹分析第52页
      · 免疫组织化学检测第52-53页
  2 结果第53-55页
    · m IL-33 蛋白的原核表达、纯化及鉴定第53页
    · ELISA检测抗血清效价及抗体的纯化第53页
    · 免疫印迹分析第53页
    · 免疫组织化学检测第53-55页
  3 讨论第55-56页
  参考文献第56-58页
第4章 抗IL-33 抗体在类风湿性关节炎中的作用第58-65页
  1 材料与方法第58-60页
    · 材料第58-59页
      · 实验动物第58页
      · 主要试剂第58-59页
      · 主要仪器第59页
      · 主要溶液第59页
    · 方法第59-60页
      · CIA模型建立及抗IL-33 多克隆抗体注射第59-60页
      · 流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群第60页
      · 组织病理学分析第60页
  2 结果第60-62页
    · Ⅱ型胶原诱导的C57BL/6 小鼠关节炎及抗IL-33 抗体对CIA模型关节炎症的影响第60-61页
    · FCM检测小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群第61-62页
    · 组织病理学分析第62页
  3 讨论第62-63页
  参考文献第63-65页
结论第65-66页
附录A 抗IL-33 抗体抑制哮喘气道炎症第66-77页
  1 材料与方法第66-70页
    · 材料第66-67页
      · 实验动物第66页
      · 主要试剂第66-67页
      · 主要仪器第67页
      · 主要溶液第67页
    · 方法第67-70页
      · 小鼠哮喘模型的制作及抗IL-33 多克隆抗体的注射第67-68页
      · 肺泡灌洗液的收集及细胞计数与分类第68-69页
      · 组织病理学分析第69页
      · 血清中IgE抗体水平的检测第69-70页
      · 统计学处理第70页
  2 结果第70-72页
    · 鼻腔给药方法的可行性分析第70页
    · 抗IL-33 多克隆抗体对哮喘模型气道炎症的影响第70页
    · 组织病理学分析第70页
    · 肺泡灌洗液中细胞因子的检测第70-71页
    · 血清中IgE抗体水平的检测第71-72页
  3 讨论第72-73页
  参考文献第73-77页
附录B 抗IL-33 抗体在小鼠EAE的作用第77-85页
  1 材料与方法第77-79页
    · 材料第77-78页
      · 实验动物第77页
      · 主要试剂第77页
      · 主要仪器第77-78页
    · 方法第78-79页
      · 小鼠EAE模型的诱导第78页
      · pcDNA·-mIL-33 质粒及抗IL-33 多克隆抗体的注射第78页
      · 血清收集及脾脏细胞培养上清细胞因子检测第78-79页
      · 组织病理检查第79页
      · 统计学处理第79页
  2 结果第79-81页
    · 小鼠发病情况第79-80页
    · 细胞因子的检测第80-81页
    · 组织切片的HE (hematoxylin-eosin)及LFB染色第81页
  3 讨论第81-83页
  参考文献第83-85页
致谢第85-86页
攻读硕士学位期间研究成果第86-87页
个人简历第87页

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