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早粳稻空育131芽期耐冷候选基因OsGH18的克隆及功能分析

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早粳稻空育131芽期耐冷候选基因OsGH18的克隆及功能分析
论文目录
 
中文摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第1章 前言第11-23页
  1.1 低温对水稻的影响第11-14页
    1.1.1 低温对农作物影响第11-12页
    1.1.2 低温对植物生物膜的影响第12-13页
    1.1.3 低温对植物芽期耐冷性的影响第13-14页
  1.2 植物耐冷性的响应机制第14-15页
    1.2.1 渗透调节在冷信号传导中的作用第14-15页
    1.2.2 ABA在冷信号转导中的作用第15页
    1.2.3 Ca~(2+)在冷信号传导中的作用第15页
  1.3 转基因技术在植物中的应用第15-19页
    1.3.1 几丁质酶的分类第16-17页
    1.3.2 GH18基因表达机理第17-18页
    1.3.3 GH18在植物抗逆中的应用第18-19页
  1.4 实验技术的应用第19-20页
    1.4.1 高通量测序技术应用第19页
    1.4.2 Gateway克隆技术第19-20页
  1.5 研究的目的和意义第20-23页
第2章 材料与方法第23-43页
  2.1 实验材料第23页
    2.1.1 植物材料第23页
    2.1.2 实验菌株第23页
  2.2 主要试剂及仪器第23-25页
    2.2.1 实验试剂第23-24页
    2.2.2 实验仪器与设备第24-25页
  2.3 实验方法第25-43页
    2.3.1 实验技术路线第25页
    2.3.2 相关实验试剂配制第25-26页
    2.3.3 水稻品种芽期耐冷性鉴定第26页
    2.3.4 水稻空育131芽期低温胁迫响应基因的确定第26-29页
    2.3.5 水稻空育131芽期耐冷候选基因的确定第29-31页
      2.3.5.1 总RNA提取与反转录第29-30页
      2.3.5.2 实时荧光定量PCR分析OsGH18基因第30-31页
    2.3.6 OsGH18基因的克隆及分析第31-35页
      2.3.6.1 目的基因全长的扩增第31-32页
      2.3.6.2 OsGH18基因克隆载体的构建第32-35页
      2.3.6.3 OsGH18基因的生物信息学分析第35页
    2.3.7 OsGH18基因植物表达载体的构建第35-37页
    2.3.8 水稻的遗传转化及初步鉴定转基因植株第37-43页
第3章 结果与分析第43-72页
  3.1 水稻耐冷品种和冷敏感品种的确定第43页
  3.2 水稻空育131芽期低温胁迫响应基因的确定第43-48页
    3.2.1 总RNA质量评估第43-44页
    3.2.2 测序质量评估第44页
    3.2.3 冷胁迫下芽期差异表达基因分析第44-46页
    3.2.4 Gene Ontolog功能富集分析第46-47页
    3.2.5 Pathway差异显著性分析第47页
    3.2.6 水稻低温响应的相关基因第47页
    3.2.7 实时荧光定量PCR验证第47-48页
  3.3 水稻空育131芽期耐冷候选基因的确定第48-50页
    3.3.1 水稻芽期总RNA的提取第48页
    3.3.2 实时荧光定量PCR检测第48-50页
  3.4 OsGH18基因的克隆及分析第50-63页
    3.4.1 OsGH18基因全长的扩增第50-51页
    3.4.2 OsGH18基因克隆载体的构建第51-53页
    3.4.3 OsGH18生物信息学分析第53-63页
      3.4.3.1 OsGH18基因序列分析第53-62页
      3.4.3.2 GH18理化性质及跨膜结构分析第62-63页
  3.5 OsGH18基因植物表达载体的构建第63-64页
    3.5.1 超量表达载体的构建第63-64页
    3.5.2 重组质粒导入农杆菌第64页
  3.6 农杆菌介导的遗传转化及转基因植株的获得第64-67页
    3.6.1 以龙粳11愈伤组织为基因受体第64-65页
    3.6.2 龙粳11遗传转化体系建立第65-66页
    3.6.3 抗性愈伤组织PCR鉴定第66-67页
      3.6.3.1 抗性愈伤组织的PCR检测第66-67页
      3.6.3.2 抗性组织的RT-PCR检测第67页
  3.7 低温胁迫处理后转基因组织的表型第67-68页
  3.8 低温胁迫前后耐冷生理指标的测定第68-72页
    3.8.1 脯氨酸含量的测定结果第68-69页
    3.8.2 保护酶活性的测定结果第69-72页
第4章 讨论第72-74页
  4.1 数字基因表达谱第72页
  4.2 低温响应目的基因的选择第72页
  4.3 OsGH18基因在逆境条件下瞬时表达第72-73页
  4.4 GH18蛋白分析及基因克隆第73页
  4.5 基因全长的克隆及Gateway法构建植物表达载体第73页
  4.6 下一步的工作展望第73-74页
第5章 结论第74-75页
参考文献第75-81页
附录I培养基的配制第81-84页
附录II Clean tag拷贝数分布统计第84-85页
附录III测序饱和度分析第85-86页
附录IV Real-time PCR验证第86-87页
致谢第87页

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