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早粳稻空育131芽期耐冷候选基因OsGH18的克隆及功能分析
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早粳稻空育131芽期耐冷候选基因OsGH18的克隆及功能分析
论文目录
中文摘要
第1-5页
Abstract
第5-11页
第1章 前言
第11-23页
1.1 低温对水稻的影响
第11-14页
1.1.1 低温对农作物影响
第11-12页
1.1.2 低温对植物生物膜的影响
第12-13页
1.1.3 低温对植物芽期耐冷性的影响
第13-14页
1.2 植物耐冷性的响应机制
第14-15页
1.2.1 渗透调节在冷信号传导中的作用
第14-15页
1.2.2 ABA在冷信号转导中的作用
第15页
1.2.3 Ca~(2+)在冷信号传导中的作用
第15页
1.3 转基因技术在植物中的应用
第15-19页
1.3.1 几丁质酶的分类
第16-17页
1.3.2 GH18基因表达机理
第17-18页
1.3.3 GH18在植物抗逆中的应用
第18-19页
1.4 实验技术的应用
第19-20页
1.4.1 高通量测序技术应用
第19页
1.4.2 Gateway克隆技术
第19-20页
1.5 研究的目的和意义
第20-23页
第2章 材料与方法
第23-43页
2.1 实验材料
第23页
2.1.1 植物材料
第23页
2.1.2 实验菌株
第23页
2.2 主要试剂及仪器
第23-25页
2.2.1 实验试剂
第23-24页
2.2.2 实验仪器与设备
第24-25页
2.3 实验方法
第25-43页
2.3.1 实验技术路线
第25页
2.3.2 相关实验试剂配制
第25-26页
2.3.3 水稻品种芽期耐冷性鉴定
第26页
2.3.4 水稻空育131芽期低温胁迫响应基因的确定
第26-29页
2.3.5 水稻空育131芽期耐冷候选基因的确定
第29-31页
2.3.5.1 总RNA提取与反转录
第29-30页
2.3.5.2 实时荧光定量PCR分析OsGH18基因
第30-31页
2.3.6 OsGH18基因的克隆及分析
第31-35页
2.3.6.1 目的基因全长的扩增
第31-32页
2.3.6.2 OsGH18基因克隆载体的构建
第32-35页
2.3.6.3 OsGH18基因的生物信息学分析
第35页
2.3.7 OsGH18基因植物表达载体的构建
第35-37页
2.3.8 水稻的遗传转化及初步鉴定转基因植株
第37-43页
第3章 结果与分析
第43-72页
3.1 水稻耐冷品种和冷敏感品种的确定
第43页
3.2 水稻空育131芽期低温胁迫响应基因的确定
第43-48页
3.2.1 总RNA质量评估
第43-44页
3.2.2 测序质量评估
第44页
3.2.3 冷胁迫下芽期差异表达基因分析
第44-46页
3.2.4 Gene Ontolog功能富集分析
第46-47页
3.2.5 Pathway差异显著性分析
第47页
3.2.6 水稻低温响应的相关基因
第47页
3.2.7 实时荧光定量PCR验证
第47-48页
3.3 水稻空育131芽期耐冷候选基因的确定
第48-50页
3.3.1 水稻芽期总RNA的提取
第48页
3.3.2 实时荧光定量PCR检测
第48-50页
3.4 OsGH18基因的克隆及分析
第50-63页
3.4.1 OsGH18基因全长的扩增
第50-51页
3.4.2 OsGH18基因克隆载体的构建
第51-53页
3.4.3 OsGH18生物信息学分析
第53-63页
3.4.3.1 OsGH18基因序列分析
第53-62页
3.4.3.2 GH18理化性质及跨膜结构分析
第62-63页
3.5 OsGH18基因植物表达载体的构建
第63-64页
3.5.1 超量表达载体的构建
第63-64页
3.5.2 重组质粒导入农杆菌
第64页
3.6 农杆菌介导的遗传转化及转基因植株的获得
第64-67页
3.6.1 以龙粳11愈伤组织为基因受体
第64-65页
3.6.2 龙粳11遗传转化体系建立
第65-66页
3.6.3 抗性愈伤组织PCR鉴定
第66-67页
3.6.3.1 抗性愈伤组织的PCR检测
第66-67页
3.6.3.2 抗性组织的RT-PCR检测
第67页
3.7 低温胁迫处理后转基因组织的表型
第67-68页
3.8 低温胁迫前后耐冷生理指标的测定
第68-72页
3.8.1 脯氨酸含量的测定结果
第68-69页
3.8.2 保护酶活性的测定结果
第69-72页
第4章 讨论
第72-74页
4.1 数字基因表达谱
第72页
4.2 低温响应目的基因的选择
第72页
4.3 OsGH18基因在逆境条件下瞬时表达
第72-73页
4.4 GH18蛋白分析及基因克隆
第73页
4.5 基因全长的克隆及Gateway法构建植物表达载体
第73页
4.6 下一步的工作展望
第73-74页
第5章 结论
第74-75页
参考文献
第75-81页
附录I培养基的配制
第81-84页
附录II Clean tag拷贝数分布统计
第84-85页
附录III测序饱和度分析
第85-86页
附录IV Real-time PCR验证
第86-87页
致谢
第87页
本篇论文共
87
页,
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