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牛分枝杆菌融合蛋白的表达及其在IFN-γ释放试验中的应用

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牛分枝杆菌融合蛋白的表达及其在IFN-γ释放试验中的应用
论文目录
 
摘要第1-7 页
Abstract第7-13 页
第一章 绪论第13-20 页
  · 牛结核病的危害第13 页
  · 流行病学第13-15 页
    · 发达国家的流行状况第13-14 页
    · 发展中国家的流行状况第14 页
    · 我国的流行状况第14-15 页
  · 牛结核病的诊断第15-17 页
    · 结核菌素皮内试验第15 页
    · 血清学诊断第15-16 页
    · 对菌体成分的检测第16 页
    · 聚合酶链反应(PCR 技术)第16 页
    · 核酸探针技术第16 页
    · γ-干扰素释放试验第16-17 页
  · 牛分枝杆菌蛋白质抗原的研究第17-18 页
    · 热休克蛋白第17 页
    · MPB 系列蛋白第17-18 页
    · ESAT-6 家族蛋白第18 页
    · Ag85 复合物第18 页
  · 牛结核病的防控策略第18-20 页
第二章 牛分枝杆菌 ESAT-6、MPB63、HSP65 和 HSP70 基因的克隆及串联表达第20-37 页
  · 实验材料第20-23 页
    · 菌株和载体第20 页
    · 主要试剂第20 页
    · 试验所用溶液及配置第20-22 页
    · 主要仪器设备第22-23 页
  · 方法第23-32 页
    · 重组质粒构建策略第23-26 页
    · 表达盒特性第26 页
    · 牛分枝杆菌基因组 DNA 的提取第26 页
    · 引物的设计第26-27 页
    · 目的基因的 PCR 扩增与产物回收第27-28 页
    · 连接到pEASY-T1 载体第28 页
    · 感受态细胞的制备第28 页
    · 转化第28 页
    · 质粒的小量提取(碱裂解法)第28 页
    · 质粒的试剂盒提取第28-29 页
    · 阳性克隆的酶切鉴定、测序鉴定第29 页
    · 3 基因串联重组质粒的构建与鉴定第29-31 页
    · 重组质粒的诱导表达第31 页
    · 表达产物的检测(SDS-PAGE)第31-32 页
    · 目的蛋白的可溶性分析第32 页
  · 结果与分析第32-35 页
    · PCR 扩增目的基因第32-33 页
    · 目的基因连接到pEASY-T1 载体的酶切鉴定第33 页
    · pEASY-T-E6、pEASY-T-M63、pEASY-T-H65 和 pEASY-T-H70 序列测定结果第33 页
    · 3 基因串联到pET-32a(+)载体的酶切鉴定及序列测定结果第33-34 页
    · pET-E6-M63-H65、pET-E6-M63-H70 质粒的原核表达第34 页
    · 目的蛋白的可溶性分析第34-35 页
  · 讨论第35-37 页
第三章 融合蛋白的分离纯化第37-43 页
  · 材料与方法第37-38 页
    · 主要试剂耗材第37 页
    · 试验所用溶液及配置第37-38 页
    · 主要仪器设备第38 页
  · 方法第38-40 页
    · 诱导后菌体的处理第38 页
    · 目的蛋白的柱纯化第38-39 页
    · 目的蛋白的 Western-blotting 鉴定第39 页
    · 透析袋的前处理第39 页
    · 透析与浓缩第39 页
    · 融合蛋白的定量第39-40 页
  · 结果与分析第40-42 页
    · 目的蛋白的柱纯化结果第40 页
    · 目的蛋白的 Western-blotting 鉴定第40-41 页
    · 蛋白定量结果第41-42 页
  · 讨论第42-43 页
第四章 融合蛋白在 IFN-γ释放试验中的应用第43-50 页
  · 材料与方法第43-44 页
    · 主要试剂耗材第43 页
    · 主要仪器设备第43 页
    · 试验所用溶液及配置第43-44 页
  · 方法第44-46 页
    · 试验牛的选取第44 页
    · 待检牛全血的采集及培养第44 页
    · 牛 IFN-γ的 ELISA 检测第44 页
    · 检测结果的判定标准第44-45 页
    · 刺激原最适剂量的确定第45 页
    · 特异性敏感性试验第45 页
    · 阳性牛的验证第45-46 页
  · 结果与分析第46-49 页
    · 刺激原最适剂量的确定第46-47 页
    · 特异性敏感性试验结果第47-48 页
    · 阳性牛的验证结果第48-49 页
  · 讨论第49-50 页
第五章 全文结论第50-51 页
参考文献第51-56 页
致谢第56-57 页
作者简历第57页

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