论文目录 | |
摘要 | 第1-7
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Abstract | 第7-13
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第一章 绪论 | 第13-20
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· 牛结核病的危害 | 第13
页 |
· 流行病学 | 第13-15
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· 发达国家的流行状况 | 第13-14
页 |
· 发展中国家的流行状况 | 第14
页 |
· 我国的流行状况 | 第14-15
页 |
· 牛结核病的诊断 | 第15-17
页 |
· 结核菌素皮内试验 | 第15
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· 血清学诊断 | 第15-16
页 |
· 对菌体成分的检测 | 第16
页 |
· 聚合酶链反应(PCR 技术) | 第16
页 |
· 核酸探针技术 | 第16
页 |
· γ-干扰素释放试验 | 第16-17
页 |
· 牛分枝杆菌蛋白质抗原的研究 | 第17-18
页 |
· 热休克蛋白 | 第17
页 |
· MPB 系列蛋白 | 第17-18
页 |
· ESAT-6 家族蛋白 | 第18
页 |
· Ag85 复合物 | 第18
页 |
· 牛结核病的防控策略 | 第18-20
页 |
第二章 牛分枝杆菌 ESAT-6、MPB63、HSP65 和 HSP70 基因的克隆及串联表达 | 第20-37
页 |
· 实验材料 | 第20-23
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· 菌株和载体 | 第20
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· 主要试剂 | 第20
页 |
· 试验所用溶液及配置 | 第20-22
页 |
· 主要仪器设备 | 第22-23
页 |
· 方法 | 第23-32
页 |
· 重组质粒构建策略 | 第23-26
页 |
· 表达盒特性 | 第26
页 |
· 牛分枝杆菌基因组 DNA 的提取 | 第26
页 |
· 引物的设计 | 第26-27
页 |
· 目的基因的 PCR 扩增与产物回收 | 第27-28
页 |
· 连接到pEASY-T1 载体 | 第28
页 |
· 感受态细胞的制备 | 第28
页 |
· 转化 | 第28
页 |
· 质粒的小量提取(碱裂解法) | 第28
页 |
· 质粒的试剂盒提取 | 第28-29
页 |
· 阳性克隆的酶切鉴定、测序鉴定 | 第29
页 |
· 3 基因串联重组质粒的构建与鉴定 | 第29-31
页 |
· 重组质粒的诱导表达 | 第31
页 |
· 表达产物的检测(SDS-PAGE) | 第31-32
页 |
· 目的蛋白的可溶性分析 | 第32
页 |
· 结果与分析 | 第32-35
页 |
· PCR 扩增目的基因 | 第32-33
页 |
· 目的基因连接到pEASY-T1 载体的酶切鉴定 | 第33
页 |
· pEASY-T-E6、pEASY-T-M63、pEASY-T-H65 和 pEASY-T-H70 序列测定结果 | 第33
页 |
· 3 基因串联到pET-32a(+)载体的酶切鉴定及序列测定结果 | 第33-34
页 |
· pET-E6-M63-H65、pET-E6-M63-H70 质粒的原核表达 | 第34
页 |
· 目的蛋白的可溶性分析 | 第34-35
页 |
· 讨论 | 第35-37
页 |
第三章 融合蛋白的分离纯化 | 第37-43
页 |
· 材料与方法 | 第37-38
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· 主要试剂耗材 | 第37
页 |
· 试验所用溶液及配置 | 第37-38
页 |
· 主要仪器设备 | 第38
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· 方法 | 第38-40
页 |
· 诱导后菌体的处理 | 第38
页 |
· 目的蛋白的柱纯化 | 第38-39
页 |
· 目的蛋白的 Western-blotting 鉴定 | 第39
页 |
· 透析袋的前处理 | 第39
页 |
· 透析与浓缩 | 第39
页 |
· 融合蛋白的定量 | 第39-40
页 |
· 结果与分析 | 第40-42
页 |
· 目的蛋白的柱纯化结果 | 第40
页 |
· 目的蛋白的 Western-blotting 鉴定 | 第40-41
页 |
· 蛋白定量结果 | 第41-42
页 |
· 讨论 | 第42-43
页 |
第四章 融合蛋白在 IFN-γ释放试验中的应用 | 第43-50
页 |
· 材料与方法 | 第43-44
页 |
· 主要试剂耗材 | 第43
页 |
· 主要仪器设备 | 第43
页 |
· 试验所用溶液及配置 | 第43-44
页 |
· 方法 | 第44-46
页 |
· 试验牛的选取 | 第44
页 |
· 待检牛全血的采集及培养 | 第44
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· 牛 IFN-γ的 ELISA 检测 | 第44
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· 检测结果的判定标准 | 第44-45
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· 刺激原最适剂量的确定 | 第45
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· 特异性敏感性试验 | 第45
页 |
· 阳性牛的验证 | 第45-46
页 |
· 结果与分析 | 第46-49
页 |
· 刺激原最适剂量的确定 | 第46-47
页 |
· 特异性敏感性试验结果 | 第47-48
页 |
· 阳性牛的验证结果 | 第48-49
页 |
· 讨论 | 第49-50
页 |
第五章 全文结论 | 第50-51
页 |
参考文献 | 第51-56
页 |
致谢 | 第56-57
页 |
作者简历 | 第57页 |