论文目录 | |
| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一部分 TGF-β处理肿瘤细胞的差异性基因的筛选及生物信息学分析 | 第20-25页 |
| 1 引言 | 第20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-21页 |
| 2.1 芯片平台及数据集资料 | 第20页 |
| 2.2 TGF-β处理肿瘤细胞的差异性基因的筛选 | 第20-21页 |
| 2.3 PLEK2在正常组织及相应肿瘤组织表达情况的预测 | 第21页 |
| 2.4 PLEK2表达与非小细胞型肺癌患者预后的meta分析结果 | 第21页 |
| 3 实验结果 | 第21-24页 |
| 3.1 差异性基因 | 第21-22页 |
| 3.2 PLEK2在正常组织及相应肿瘤组织表达情况 | 第22-23页 |
| 3.3 PLEK2表达与非小细胞型肺癌患者预后的meta分析结果 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24页 |
| 5 结论 | 第24-25页 |
| 第二部分 PLEK2在TGF-β诱导细胞中的表达验证及临床样本中的表达分析 | 第25-35页 |
| 1 引言 | 第25页 |
| 2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1 细胞株及肺腺癌组织芯片 | 第25页 |
| 2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 仪器及耗材 | 第26页 |
| 2.4 主要试剂配置 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.1 qRT-PCR | 第27-29页 |
| 3.2 Westernblot | 第29-30页 |
| 3.3 免疫组化 | 第30-31页 |
| 3.4 生存分析 | 第31页 |
| 3.5 统计学方法 | 第31页 |
| 4 实验结果 | 第31-33页 |
| 4.1 PLEK2在TGF-β诱导细胞中的表达 | 第31-32页 |
| 4.2 PLEK2在NSCLC组织中的表达 | 第32-33页 |
| 5 讨论 | 第33-34页 |
| 6 结论 | 第34-35页 |
| 第三部分 PLEK2促进非小细胞肺癌细胞EMT,迁移及侵袭 | 第35-47页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第35页 |
| 2.2 主要试剂、耗材 | 第35-36页 |
| 3 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.1 细胞转染（6孔板为例） | 第36页 |
| 3.2 PLEK2干扰序列的筛选 | 第36页 |
| 3.3 慢病毒感染细胞及稳定细胞株的筛选 | 第36页 |
| 3.4 免疫荧光实验 | 第36-37页 |
| 3.5 细胞划痕实验 | 第37页 |
| 3.6 Transwell迁移及侵袭实验 | 第37页 |
| 3.7 裸鼠尾静脉肺转移模型 | 第37页 |
| 3.8 HE染色 | 第37-38页 |
| 4 实验结果 | 第38-45页 |
| 4.1 PLEK2过表达明显促进NSCLC细胞EMT,迁移及侵袭 | 第38-40页 |
| 4.2 PLEK2沉默抑制NSCLC细胞EMT,迁移及侵袭 | 第40-43页 |
| 4.3 PLEK2沉默抑制TGF-β诱导的EMT,迁移及侵袭 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 第四部分 PLEK2促进肺血管内皮EndoMT及屏障功能破坏 | 第47-53页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2.1 主要试剂 | 第47页 |
| 2.2 主要耗材及仪器 | 第47-48页 |
| 3 实验方法 | 第48页 |
| 3.1 qRT-PCR(方法同第二部分) | 第48页 |
| 3.2 Western | 第48页 |
| 3.3 IF | 第48页 |
| 3.4 血管通透性实验 | 第48页 |
| 3.5 内皮细胞屏障功能实验 | 第48页 |
| 4 结果 | 第48-51页 |
| 4.1 过表达PLEK2促进HMVEC-L细胞EndoMT及屏障功能破坏 | 第48-50页 |
| 4.2 沉默PLEK2抑制TGF-β诱导的EndoMT及屏障功能破坏 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 第五部分 PLEK2引起NSCLC细胞转移的机制研究 | 第53-62页 |
| 1 引言 | 第53-54页 |
| 2 实验材料、试剂 | 第54页 |
| 3 实验方法 | 第54-55页 |
| 3.1 qRT-PCR | 第54页 |
| 3.2 Western | 第54页 |
| 3.3 IF | 第54-55页 |
| 3.4 免疫荧光共定位 | 第55页 |
| 3.5 免疫共沉淀(Co-IP)（碧云天试剂盒说明书步骤） | 第55页 |
| 3.6 SHIP2磷酸化和泛素化检测 | 第55页 |
| 4 结果 | 第55-60页 |
| 4.1 PLEK2与SHIP2存在相互作用 | 第55-56页 |
| 4.2 TGF-β处理及PLEK2的过表达可明显抑制SHIP2的表达而促进SHIP2磷酸化和泛素化水平 | 第56页 |
| 4.3 SHIP2过表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活而抑制NSCLC细胞的EMT,迁移和侵袭 | 第56-59页 |
| 4.4 TGF-β处理及PLEK2的过表达促进TGF-β/PI3K/AKT信号通路的激活 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 文献综述 | 第68-76页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
