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PLEK2在非小细胞肺癌转移中的作用及机制研究

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PLEK2在非小细胞肺癌转移中的作用及机制研究
论文目录
 
摘要第1-12页
Abstract第12-17页
前言第17-20页
第一部分 TGF-β处理肿瘤细胞的差异性基因的筛选及生物信息学分析第20-25页
1 引言第20页
2 实验材料与方法第20-21页
  2.1 芯片平台及数据集资料第20页
  2.2 TGF-β处理肿瘤细胞的差异性基因的筛选第20-21页
  2.3 PLEK2在正常组织及相应肿瘤组织表达情况的预测第21页
  2.4 PLEK2表达与非小细胞型肺癌患者预后的meta分析结果第21页
3 实验结果第21-24页
  3.1 差异性基因第21-22页
  3.2 PLEK2在正常组织及相应肿瘤组织表达情况第22-23页
  3.3 PLEK2表达与非小细胞型肺癌患者预后的meta分析结果第23-24页
4 讨论第24页
5 结论第24-25页
第二部分 PLEK2在TGF-β诱导细胞中的表达验证及临床样本中的表达分析第25-35页
1 引言第25页
2 实验材料第25-27页
  2.1 细胞株及肺腺癌组织芯片第25页
  2.2 主要试剂第25-26页
  2.3 仪器及耗材第26页
  2.4 主要试剂配置第26-27页
3 实验方法第27-31页
  3.1 qRT-PCR第27-29页
  3.2 Westernblot第29-30页
  3.3 免疫组化第30-31页
  3.4 生存分析第31页
  3.5 统计学方法第31页
4 实验结果第31-33页
  4.1 PLEK2在TGF-β诱导细胞中的表达第31-32页
  4.2 PLEK2在NSCLC组织中的表达第32-33页
5 讨论第33-34页
6 结论第34-35页
第三部分 PLEK2促进非小细胞肺癌细胞EMT,迁移及侵袭第35-47页
1 引言第35页
2 实验材料第35-36页
  2.1 实验材料第35页
  2.2 主要试剂、耗材第35-36页
3 实验方法第36-38页
  3.1 细胞转染(6孔板为例)第36页
  3.2 PLEK2干扰序列的筛选第36页
  3.3 慢病毒感染细胞及稳定细胞株的筛选第36页
  3.4 免疫荧光实验第36-37页
  3.5 细胞划痕实验第37页
  3.6 Transwell迁移及侵袭实验第37页
  3.7 裸鼠尾静脉肺转移模型第37页
  3.8 HE染色第37-38页
4 实验结果第38-45页
  4.1 PLEK2过表达明显促进NSCLC细胞EMT,迁移及侵袭第38-40页
  4.2 PLEK2沉默抑制NSCLC细胞EMT,迁移及侵袭第40-43页
  4.3 PLEK2沉默抑制TGF-β诱导的EMT,迁移及侵袭第43-45页
5 讨论第45-46页
6 结论第46-47页
第四部分 PLEK2促进肺血管内皮EndoMT及屏障功能破坏第47-53页
1 引言第47-48页
  2.1 主要试剂第47页
  2.2 主要耗材及仪器第47-48页
3 实验方法第48页
  3.1 qRT-PCR(方法同第二部分)第48页
  3.2 Western第48页
  3.3 IF第48页
  3.4 血管通透性实验第48页
  3.5 内皮细胞屏障功能实验第48页
4 结果第48-51页
  4.1 过表达PLEK2促进HMVEC-L细胞EndoMT及屏障功能破坏第48-50页
  4.2 沉默PLEK2抑制TGF-β诱导的EndoMT及屏障功能破坏第50-51页
5 讨论第51-52页
6 结论第52-53页
第五部分 PLEK2引起NSCLC细胞转移的机制研究第53-62页
1 引言第53-54页
2 实验材料、试剂第54页
3 实验方法第54-55页
  3.1 qRT-PCR第54页
  3.2 Western第54页
  3.3 IF第54-55页
  3.4 免疫荧光共定位第55页
  3.5 免疫共沉淀(Co-IP)(碧云天试剂盒说明书步骤)第55页
  3.6 SHIP2磷酸化和泛素化检测第55页
4 结果第55-60页
  4.1 PLEK2与SHIP2存在相互作用第55-56页
  4.2 TGF-β处理及PLEK2的过表达可明显抑制SHIP2的表达而促进SHIP2磷酸化和泛素化水平第56页
  4.3 SHIP2过表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活而抑制NSCLC细胞的EMT,迁移和侵袭第56-59页
  4.4 TGF-β处理及PLEK2的过表达促进TGF-β/PI3K/AKT信号通路的激活第59-60页
5 讨论第60-61页
6 结论第61-62页
全文结论第62-63页
参考文献第63-68页
文献综述第68-76页
参考文献第72-76页
附录第76-77页
攻读学位期间的研究成果第77-78页
致谢第78-79页

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