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基于CRISPR/Cas的成像系统构建及染色体在HEK293T细胞核中空间位置的模拟

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基于CRISPR/Cas的成像系统构建及染色体在HEK293T细胞核中空间位置的模拟
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-11页
缩略语表(Abbreviation)第11-13页
第一章 前言第13-32页
  1.1 人类基因组第13-18页
    1.1.1 人类基因组学发展历程第13-14页
    1.1.2 研究 3D基因组的重要性第14-15页
    1.1.3 研究 3D基因组的主要方法第15-18页
  1.2 CRISPR/Cas系统第18-24页
    1.2.1 CRSPR/Cas系统的组成第18-19页
    1.2.2 CRISPR/Cas系统的发现过程第19-21页
    1.2.3 CRISPR/Cas系统的作用机制第21-22页
    1.2.4 CRISPR/Cas系统的应用第22-24页
  1.3 MS2-(MS2 coat protein)系统与(box B)-(N protein)系统第24-29页
    1.3.1 MS2-(MS2 coat protein)系统第25-27页
    1.3.2 (box B)-(N protein)系统第27-29页
  1.4 腺相关病毒Adeno-associated viruse(AAV)第29-30页
  1.5 本课题的实验设计思路第30页
  1.6 研究目的与意义第30-32页
第二章 材料与方法第32-47页
  2.1 实验材料第32-34页
    2.1.1 质粒、菌株、细胞系第32页
    2.1.2 主要药品与试剂第32页
    2.1.3 主要仪器第32-33页
    2.1.4 主要培养基、抗生素及其配置第33页
    2.1.5 缓冲液(溶液)及其配制第33-34页
    2.1.6 主要生物学分析软件第34页
  2.2 实验方法第34-47页
    2.2.1 常规分子克隆实验第34-38页
    2.2.2 PCR合成特殊片段第38-41页
    2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)第41-42页
    2.2.4 g RNA的设计及合成第42页
    2.2.5 HEK293T细胞的转染第42页
    2.2.6 FISH第42-43页
    2.2.7 相关引物的设计与合成第43-44页
    2.2.8 系统CCMM及系统CCBN的构建第44-47页
第三章 结果与分析第47-65页
  3.1 CRISPR/Cas衍生系统CCMM及CCBN的构建第47-49页
    3.1.1 系统CCMM的构建第47-48页
    3.1.2 系统CCBN的构建第48-49页
  3.2 系统CCMM与系统CCBN的验证第49-51页
    3.2.1 系统CCMM与系统CCBN相互验证可行性第49-50页
    3.2.2 FISH验证系统CCBN的可行性第50-51页
  3.3 相关gRNA的设计及gRNA与系统CCMM、CCBN的连接第51-58页
    3.3.1 gRNA靶定位点的寻找及gRNA的设计第51-56页
    3.3.2 相关gRNA与系统CCMM、CCBN的连接第56-58页
  3.4 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察及模拟第58-65页
    3.4.1 chr1、chr2、chr19、chr22四种染色体单独在HEK293T细胞中的观察第58-60页
    3.4.2 chr1、chr2在HEK293T细胞中空间相对位置的观察第60-61页
    3.4.3 chr1、chr19在HEK293T细胞中空间相对位置的观察第61-62页
    3.4.4 chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察第62-64页
    3.4.5 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的模拟第64-65页
第四章 讨论第65-69页
  4.1 系统CCMM与CCBN的构建第65-66页
  4.2 系统CCMM与CCBN的优缺点第66-67页
  4.3 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察及模拟第67-69页
参考文献第69-76页
致谢第76页

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