论文目录 | |
摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第11-13页 |
第一章 前言 | 第13-32页 |
1.1 人类基因组 | 第13-18页 |
1.1.1 人类基因组学发展历程 | 第13-14页 |
1.1.2 研究 3D基因组的重要性 | 第14-15页 |
1.1.3 研究 3D基因组的主要方法 | 第15-18页 |
1.2 CRISPR/Cas系统 | 第18-24页 |
1.2.1 CRSPR/Cas系统的组成 | 第18-19页 |
1.2.2 CRISPR/Cas系统的发现过程 | 第19-21页 |
1.2.3 CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第21-22页 |
1.2.4 CRISPR/Cas系统的应用 | 第22-24页 |
1.3 MS2-(MS2 coat protein)系统与(box B)-(N protein)系统 | 第24-29页 |
1.3.1 MS2-(MS2 coat protein)系统 | 第25-27页 |
1.3.2 (box B)-(N protein)系统 | 第27-29页 |
1.4 腺相关病毒Adeno-associated viruse(AAV) | 第29-30页 |
1.5 本课题的实验设计思路 | 第30页 |
1.6 研究目的与意义 | 第30-32页 |
第二章 材料与方法 | 第32-47页 |
2.1 实验材料 | 第32-34页 |
2.1.1 质粒、菌株、细胞系 | 第32页 |
2.1.2 主要药品与试剂 | 第32页 |
2.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
2.1.4 主要培养基、抗生素及其配置 | 第33页 |
2.1.5 缓冲液(溶液)及其配制 | 第33-34页 |
2.1.6 主要生物学分析软件 | 第34页 |
2.2 实验方法 | 第34-47页 |
2.2.1 常规分子克隆实验 | 第34-38页 |
2.2.2 PCR合成特殊片段 | 第38-41页 |
2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第41-42页 |
2.2.4 g RNA的设计及合成 | 第42页 |
2.2.5 HEK293T细胞的转染 | 第42页 |
2.2.6 FISH | 第42-43页 |
2.2.7 相关引物的设计与合成 | 第43-44页 |
2.2.8 系统CCMM及系统CCBN的构建 | 第44-47页 |
第三章 结果与分析 | 第47-65页 |
3.1 CRISPR/Cas衍生系统CCMM及CCBN的构建 | 第47-49页 |
3.1.1 系统CCMM的构建 | 第47-48页 |
3.1.2 系统CCBN的构建 | 第48-49页 |
3.2 系统CCMM与系统CCBN的验证 | 第49-51页 |
3.2.1 系统CCMM与系统CCBN相互验证可行性 | 第49-50页 |
3.2.2 FISH验证系统CCBN的可行性 | 第50-51页 |
3.3 相关gRNA的设计及gRNA与系统CCMM、CCBN的连接 | 第51-58页 |
3.3.1 gRNA靶定位点的寻找及gRNA的设计 | 第51-56页 |
3.3.2 相关gRNA与系统CCMM、CCBN的连接 | 第56-58页 |
3.4 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察及模拟 | 第58-65页 |
3.4.1 chr1、chr2、chr19、chr22四种染色体单独在HEK293T细胞中的观察 | 第58-60页 |
3.4.2 chr1、chr2在HEK293T细胞中空间相对位置的观察 | 第60-61页 |
3.4.3 chr1、chr19在HEK293T细胞中空间相对位置的观察 | 第61-62页 |
3.4.4 chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察 | 第62-64页 |
3.4.5 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的模拟 | 第64-65页 |
第四章 讨论 | 第65-69页 |
4.1 系统CCMM与CCBN的构建 | 第65-66页 |
4.2 系统CCMM与CCBN的优缺点 | 第66-67页 |
4.3 chr1、chr2、chr19、chr22在HEK293T细胞中空间相对位置的观察及模拟 | 第67-69页 |
参考文献 | 第69-76页 |
致谢 | 第76页 |