论文目录 | |
| 缩略词表 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 半夏研究进展 | 第11-16页 |
| 1.1.1 半夏简介 | 第11页 |
| 1.1.2 中国半夏的分布与种植 | 第11-12页 |
| 1.1.3 半夏生物学特性及种植障碍 | 第12-13页 |
| 1.1.4 半夏的化学成分及药理研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4.1 化学成分 | 第13页 |
| 1.1.4.2 药理研究 | 第13-14页 |
| 1.1.5 半夏组织培养研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.5.1 外植体的选择 | 第14-15页 |
| 1.1.5.2 半夏组织培养再生途径的研究进展 | 第15页 |
| 1.1.5.3 愈伤组织的诱导和植株再生 | 第15-16页 |
| 1.1.5.4 一次成苗技术 | 第16页 |
| 1.2 农杆菌介导单子叶转基因研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 农杆菌遗传转化的原理 | 第17页 |
| 1.2.2 农杆菌介导的单子叶植物的转化 | 第17页 |
| 1.2.3 影响农杆菌介导转化单子叶植物效率的因素 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 外植体类型 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 菌株类型 | 第18页 |
| 1.2.3.3 培养基添加物 | 第18页 |
| 1.2.3.4 共培养时间及温度 | 第18-19页 |
| 1.2.3.5 植物转化材料的受伤处理 | 第19页 |
| 1.2.4 抗高温育种及ERECTA基因增强作物对高温耐受性的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.5 植物次生代谢及HMGR基因影响代谢产物积累研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.6 植物抗逆育种及IAP基因研究进展 | 第21页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 半夏品种 | 第23页 |
| 2.1.2 材料 | 第23页 |
| 2.1.3 菌株 | 第23页 |
| 2.1.4 酶和试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第24页 |
| 2.1.6 培养基 | 第24页 |
| 2.1.6.1 LB培养基 | 第24页 |
| 2.1.6.2 半夏转化培养基 | 第24页 |
| 2.1.7 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 植物表达载体（PCA1301-HMGR）的构建 | 第25-30页 |
| 2.2.1.1 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 载体的初步构建 | 第26-29页 |
| 2.2.1.3 重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.2 植物表达载体（PCA1301-HMGR-ER）的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.2.1 载体的初步构建 | 第30-33页 |
| 2.2.2.2 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.3 植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第34-36页 |
| 2.2.3.1 植物表达载体的保存 | 第34页 |
| 2.2.3.2 农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.3.3 表达载体转化农杆菌EHA105（电击法） | 第35页 |
| 2.2.3.4 阳性克隆的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.4 农杆菌介导半夏遗传转化及转基因半夏植株的获得 | 第36-41页 |
| 2.2.4.1 无菌外植体的获得 | 第36页 |
| 2.2.4.2 工程菌的活化 | 第36页 |
| 2.2.4.3 草胺磷筛选压的选择 | 第36-37页 |
| 2.2.4.4 潮霉素筛选压的选择 | 第37页 |
| 2.2.4.5 叶盘法转化 | 第37页 |
| 2.2.4.6 转基因植株的PCR检测 | 第37-38页 |
| 2.2.4.7 转基因半夏RT-PCR检测 | 第38-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-58页 |
| 3.0 植物表达载体（PCA1301-HMGR）的构建 | 第41-42页 |
| 3.0.1 大肠杆菌E. coli质粒PCA1301-HMGR PCR验证结果 | 第41页 |
| 3.0.2 PCA1301-HMGR测序结果 | 第41-42页 |
| 3.1 植物表达载体（PCA1301-HMGR-ER）的构建 | 第42页 |
| 3.1.1 大肠杆菌E. coli质粒PCA1301-HMGR-ER PCR验证结果 | 第42页 |
| 3.2 农杆菌介导半夏遗传转化及转基因半夏植株的获得 | 第42-47页 |
| 3.2.1 植物表达载体转化农杆菌 | 第42-46页 |
| 3.2.1.1 农杆菌EHA105质粒PCA1301-HMGR-ER PCR验证结果 | 第42-43页 |
| 3.2.1.2 农杆菌EHA105质粒PCA1301-HMGR PCR验证结果 | 第43-44页 |
| 3.2.1.3 农杆菌EHA105质粒PCA3301-ER PCR验证结果 | 第44页 |
| 3.2.1.4 农杆菌EHA105质粒PCA3301-GUS PCR验证结果 | 第44-45页 |
| 3.2.1.5 农杆菌EHA105质粒PCA3301- iap-p35 PCR验证结果 | 第45页 |
| 3.2.1.6 农杆菌EHA105质粒PZY100BAR验证结果 | 第45-46页 |
| 3.2.2 半夏成苗培养基激素浓度配比筛选 | 第46-47页 |
| 3.3 抗生素工作浓度筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.1 潮霉素工作浓度筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.2 草胺磷工作浓度筛选 | 第48页 |
| 3.4 带抗性半夏苗的筛选 | 第48-49页 |
| 3.5 转基因半夏的PCR验证 | 第49-52页 |
| 3.5.1 转HMGR基因半夏苗PCR验证结果 | 第49页 |
| 3.5.2 转ER基因半夏苗PCR验证结果 | 第49-50页 |
| 3.5.3 转ER+ HMGR基因半夏苗PCR验证结果 | 第50-51页 |
| 3.5.4 转BAR基因半夏苗PCR验证结果 | 第51页 |
| 3.5.5 转IAP基因半夏苗PCR验证结果 | 第51-52页 |
| 3.5.6 转GUS基因半夏苗PCR验证结果 | 第52页 |
| 3.6 不同基因在半夏中表达量的测定 | 第52-56页 |
| 3.6.1 HMGR基因在转基因半夏PCA1301-HMGR株系中的表达量 | 第52-53页 |
| 3.6.2 ER基因在转基因半夏PCA1301-ER株系中的表达量 | 第53-54页 |
| 3.6.3 ER、HMGR基因在PCA1301-ER-HMGR转基因株系中的表达量 | 第54-55页 |
| 3.6.4 IAP基因在PCA3301-IAP转基因株系中的表达量 | 第55-56页 |
| 3.7 转基因半夏抗热性的测定 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 主要结论 | 第58-59页 |
| 4.1.1 载体构建 | 第58页 |
| 4.1.2 农杆菌介导的半夏遗传转化 | 第58-59页 |
| 4.2 本文的特色与创新点 | 第59页 |
| 4.3 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 附录A | 第67-68页 |
| 附录B | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
