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蛋黄蛋白质多肽的制备及其促成骨活性的研究

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蛋黄蛋白质多肽的制备及其促成骨活性的研究
论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-12页
缩略语表第12-13页
第一章 文献综述第13-23页
1 骨质疏松症第13页
2 成骨细胞第13-16页
  2.1 成骨细胞的增殖第14页
  2.2 成骨细胞的分化第14-15页
    2.2.1 碱性磷酸酶(ALP)第14-15页
    2.2.2 I型胶原蛋白(Col- I)第15页
    2.2.3 骨钙素(OC)第15页
    2.2.4 特异性因子(Runx2)第15页
  2.3 成骨细胞的矿化第15-16页
3 食源性功能成分对成骨细胞的影响第16-18页
  3.1 乳铁蛋白对成骨细胞分化的影响第16页
  3.2 胶原蛋白水解物对成骨细胞分化的影响第16-17页
  3.3 天然产物对成骨细胞分化的影响第17-18页
4 蛋黄水解工艺与蛋黄蛋白质多肽活性第18-21页
  4.1 蛋黄水解工艺第18-19页
  4.2 蛋黄蛋白质多肽活性第19-21页
    4.2.1 抗氧化活性第19页
    4.2.2 矿物质结合能力第19-20页
    4.2.3 降血压活性第20页
    4.2.4 调节骨代谢活性第20-21页
5 选题目的意义及主要研究内容第21-23页
  5.1 本课题目的及意义第21页
  5.2 主要研究内容第21-23页
第二章 蛋黄促成骨活性多肽的酶系筛选第23-34页
1 材料与方法第23-28页
  1.1 材料第23-24页
    1.1.1 原料第23页
    1.1.2 主要试剂第23-24页
    1.1.3 主要仪器和设备第24页
  1.2 方法第24-28页
    1.2.1 细胞培养操作第24-25页
    1.2.2 蛋黄中水溶性蛋白提取第25-26页
    1.2.3 蛋黄水溶性蛋白的水解反应第26页
    1.2.4 CCK-8 法检测水解产物对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响第26-27页
    1.2.5 不同水解产物对MC3T3-E1细胞增殖活性影响的比较第27页
    1.2.6 数据分析第27-28页
2 结果与分析第28-32页
  2.1 MC3T3-E1细胞培养不同时间形态第28页
  2.2 MC3T3-E1细胞不同接种量与OD值关系的标准曲线第28-29页
  2.3 中性蛋白酶水解产物对MC3T3-E1细胞增殖的影响第29-30页
  2.4 风味蛋白酶水解产物对MC3T3-E1细胞增殖的影响第30页
  2.5 胰蛋白酶水解产物对MC3T3-E1细胞增殖的影响第30-31页
  2.6 碱性蛋白酶水解产物对MC3T3-E1细胞增殖的影响第31页
  2.7 四种酶解产物对MC3T3-E1细胞增殖活性的比较第31-32页
3 讨论第32-33页
4 本章小结第33-34页
第三章 蛋黄促成骨活性多肽水解条件的优化第34-48页
1 材料与方法第34-39页
  1.1 材料第34-35页
    1.1.1 原料第34页
    1.1.2 主要试剂第34-35页
    1.1.3 主要仪器与设备第35页
  1.2 方法第35-39页
    1.2.1 细胞培养操作第35页
    1.2.2 蛋黄水溶性蛋白的提取第35-36页
    1.2.3 胰蛋白酶水解条件的优化第36页
    1.2.4 风味蛋白酶水解条件的优化第36-37页
    1.2.5 复合蛋白酶的正交实验第37页
    1.2.6 水解度的测定第37-38页
    1.2.7 水解产物对MC3T3-E1细胞的增殖影响第38-39页
    1.2.8 数据分析第39页
2 结果与分析第39-45页
  2.1 不同时间下胰酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第39-40页
  2.2 不同pH下胰酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第40-41页
  2.3 不同温度下胰酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第41页
  2.4 不同酶与底物比的胰酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第41-42页
  2.5 不同时间下风味酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第42页
  2.6 不同pH下风味酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第42-43页
  2.7 不同温度下风味酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第43-44页
  2.8 不同酶与底物比的风味酶水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第44页
  2.9 胰蛋白酶与风味蛋白酶复合的正交实验结果第44-45页
3 讨论第45-46页
4 本章小结第46-48页
第四章 蛋黄水解产物对MC3T3-E1分化及矿化的影响第48-66页
1 材料与方法第48-55页
  1.1 材料第48-50页
    1.1.1 原料第48页
    1.1.2 主要试剂第48-49页
    1.1.3 主要仪器与设备第49-50页
  1.2 方法第50-55页
    1.2.1 细胞培养操作第50页
    1.2.2 蛋黄水溶性蛋白的提取第50页
    1.2.3 制备蛋黄蛋白质水解产物第50页
    1.2.4 CCK-8 试剂盒测定MC3T3-E1增值率第50-51页
    1.2.5 流式细胞仪分析细胞周期第51页
    1.2.6 ALP活力的检测第51-52页
    1.2.7 OC相对含量的测定第52-53页
    1.2.8 RT-PCR测定成骨细胞相关基因表达第53-54页
    1.2.9 茜素红染色测定矿化结节第54-55页
    1.2.10 数据分析第55页
2 结果与分析第55-63页
  2.1 蛋黄蛋白质水解产物对MC3T3-E1增殖的影响第55-56页
  2.2 蛋黄蛋白质水解产物对MC3T3-E1细胞周期的影响第56-58页
  2.3 蛋黄蛋白质水解产物对MC3T3-E1分化的细胞外基质影响第58-60页
    2.3.1 水解产物对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响第58-59页
    2.3.2 水解产物对MC3T3-E1细胞OC相对含量的影响第59-60页
  2.4 蛋黄蛋白质水解产物对成骨细胞关联基因表达影响第60-62页
  2.5 蛋黄蛋白质多肽对MC3T3-E1矿化影响第62-63页
3 讨论第63-64页
4 本章小结第64-66页
第五章 蛋黄水解产物的初分离及鉴定第66-80页
1 材料与方法第66-70页
  1.1 材料第66-68页
    1.1.1 原料第66页
    1.1.2 主要试剂第66-67页
    1.1.3 主要仪器和设备第67-68页
  1.2 方法第68-70页
    1.2.1 蛋黄蛋白质水解产物的制备第68页
    1.2.2 纯化系统分离水解产物第68页
    1.2.3 超滤分离水解产物第68页
    1.2.4 不同组分对MC3T3-E1细胞增殖及分化的影响第68-69页
    1.2.5 不同组分的蛋黄水解产物的氨基酸含量第69页
    1.2.6 MALDI-TOF MS/MS分析不同组分肽段的情况第69页
    1.2.7 数据分析第69-70页
2 结果分析第70-78页
  2.1 Superdex peptide分离水解产物及不同组分的活性第70-71页
  2.2 10 kDa超滤分离得到不同组分的活性第71-72页
  2.3 30 kDa超滤分离得到不同组分的活性第72-73页
  2.4 蛋黄水解产物不同组分的氨基酸含量分析第73-74页
  2.5 MALDI-TOF/TOF分析EYPH的肽段组成第74-78页
3 讨论第78-79页
4 本章小结第79-80页
第六章 结论与展望第80-84页
1 结论第80-82页
2 本实验创新点第82页
3 展望第82-84页
参考文献第84-93页
附录第93-94页
致谢第94页

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