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根中优势表达启动子的筛选和GhCPK33在棉花抗黄萎病中的功能研究

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根中优势表达启动子的筛选和GhCPK33在棉花抗黄萎病中的功能研究
论文目录
 
摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
缩略语表第10-11页
1 文献综述第11-20页
  1.1 黄萎病与黄萎病菌的概述第11-12页
  1.2 植物免疫反应第12-17页
    1.2.1 先天性植物免疫系统第12-13页
    1.2.2 依赖于R基因的免疫反应第13-14页
    1.2.3 激素信号路径介导的抗病反应第14-15页
    1.2.4 依赖于钙离子的蛋白激酶在植物免疫系统中的作用第15-17页
  1.3 植物启动子的研究现状第17-19页
    1.3.1 启动子的分类第17-18页
    1.3.2 组织特异型启动子的应用及研究现状第18-19页
  1.4 本课题研究的目的和意义第19-20页
2 材料方法第20-30页
  2.1 实验材料第20-21页
    2.1.1 基因来源第20页
    2.1.2 植物材料第20页
    2.1.3 主要菌株和载体第20-21页
    2.1.4 主要酶类和试剂第21页
  2.2 实验方法第21-30页
    2.2.1 根中优势表达启动子和GhCPK33的序列分析第21页
    2.2.2 GhCPK33表达模式分析第21-22页
    2.2.3 棉花根系RNA的提取及浓度测定第22页
    2.2.4 反转录总RNA合成cDNA第22页
    2.2.5 RT-PCR和qRT-PCR分析第22-23页
    2.2.6 启动子连接GUS报告基因的载体构建第23-25页
    2.2.7 VIGS载体构建第25-26页
    2.2.8 棉花幼苗培育第26页
    2.2.9 棉花幼苗的VIGS处理第26-27页
    2.2.10 激素含量测定第27页
    2.2.11 棉花黄萎病病原菌的活化及培养第27-28页
    2.2.12 棉花黄萎病菌的接种第28页
    2.2.13 棉花幼苗接种黄萎病菌后发病率及病指统计第28页
    2.2.14 接菌后对棉株剖秆观察及茎段恢复培养及菌量检测第28-29页
    2.2.15 GhCPK33表达被抑制后的对灰霉菌的抗性鉴定第29页
    2.2.16 转基因拟南芥及转基因鉴定第29-30页
3 结果与分析第30-39页
  3.1 根中优势表达启动子的结果第30-33页
    3.1.1 根中优势表达启动子的来源第30-31页
    3.1.2 根中优势表达基因在棉花各个组织中RT-PCR结果第31页
    3.1.3 根中优势表达基因的启动子(Gbscaffold12396.4P和Gbscaffold4369.10P)的克隆及结构特点第31-33页
  3.2 GhCPK33在棉花抗黄萎病方面的功能研究第33-39页
    3.2.1 GhCPK33的基因来源第33-34页
    3.2.2 GhCPK33的结构特点及进化树的构建第34页
    3.2.3 GhCPK33的表达模式分析第34-35页
    3.2.4 激素处理后GhCPK33的表达模式第35-36页
    3.2.5 VIGS沉默目标基因后海岛棉棉株表型第36-39页
4 讨论与结论第39-42页
  4.1 根中优势表达启动子的选择第39-40页
  4.2 GhCPK33在棉花抗黄萎病菌中的作用第40-42页
参考文献第42-48页
附录第48-54页
附录A.主要缓冲液的配制第48页
附录B.培养基配方第48-49页
附录C.棉花基因组DNA抽提方法第49-50页
附录D.棉花基因组RNA抽提方法(异硫氰酸胍法)第50-51页
  附录E. 拟南芥遗传转化的步骤第51页
附录F.拟南芥种植步骤第51-52页
附录G.实验中用到的引物序列第52-54页
致谢第54页

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