论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 棉花及棉花黄萎病 | 第11-13页 |
| 1.1.1 棉花及其主要病害 | 第11-12页 |
| 1.1.2 黄萎病菌及其致病机制 | 第12-13页 |
| 1.2 植物抗病信号路径 | 第13-15页 |
| 1.2.1 R基因介导的抗病信号路径 | 第13-14页 |
| 1.2.2 激素介导的抗病信号路径 | 第14-15页 |
| 1.3 VIGS技术及其应用 | 第15-16页 |
| 1.3.1 VIGS技术原理 | 第15页 |
| 1.3.2 VIGS技术的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 小G蛋白在植物发育和免疫中的功能研究 | 第16-19页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要菌株和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要酶类和试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 病原菌的活化和培养 | 第21页 |
| 2.2.2 GhROP6表达模式分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3 棉花黄萎病菌的接种 | 第22页 |
| 2.2.4 棉花幼苗接菌后发病率及病指统计 | 第22-23页 |
| 2.2.5 接菌棉株茎段的恢复培养 | 第23页 |
| 2.2.6 棉花根系RNA的提取及浓度测定 | 第23页 |
| 2.2.7 反转录RNA合成cDNA | 第23-24页 |
| 2.2.8 RT-PCR和qRT-PCR分析 | 第24-25页 |
| 2.2.9 VIGS载体构建 | 第25-26页 |
| 2.2.10 棉花幼苗的培育 | 第26页 |
| 2.2.11 棉花幼苗的VIGS处理 | 第26-27页 |
| 2.2.12 激素含量测定 | 第27页 |
| 2.2.13 H_2O_2含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.14 总可溶性酚和木质素含量的测定 | 第28页 |
| 2.2.15 转基因表达载体构建和棉花遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.2.16 转基因植株阳性鉴定 | 第29页 |
| 2.2.17 转基因植株表达量鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.18 转基因植株拷贝数鉴定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-43页 |
| 3.1 小G蛋白基因GhROP6的序列分析 | 第31-32页 |
| 3.2 GhROP6在不同物种中的进化分析 | 第32-33页 |
| 3.3 GhROP6的表达模式分析 | 第33-34页 |
| 3.3.1 GhROP6在陆地棉不同组织中的表达分析 | 第33页 |
| 3.3.2 GhROP6在陆地棉中受黄萎病菌诱导后的表达分析 | 第33-34页 |
| 3.3.3 GhROP6在陆地棉受过氧化氢和激素诱导下的表达分析 | 第34页 |
| 3.4 抑制GhROP6表达后削弱了棉花对黄萎病的抗性 | 第34-36页 |
| 3.5 GhROP6干涉后抑制了JA合成 | 第36-39页 |
| 3.6 抑制GhROP6表达后同时降低了木质素的合成 | 第39-41页 |
| 3.7 GhROP6抑制表达后影响过氧化氢的合成 | 第41页 |
| 3.8 GhROP6转基因植株鉴定 | 第41-43页 |
| 3.8.1 GhROP6转基因植株表达量鉴定 | 第41-42页 |
| 3.8.2 GhROP6转基因植株T0代的拷贝数鉴定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-48页 |
| 4.1 GhROP6蛋白参与棉花生长发育调控 | 第43-44页 |
| 4.2 抑制GhROP6表达削弱棉花抗病性与JA合成相关 | 第44-45页 |
| 4.3 GhROP6参与调控木质素及过氧化氢的合成 | 第45-46页 |
| 4.4 ROP介导的信号传递 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-59页 |
| 附录 | 第59-68页 |
| 附录 1．主要缓冲液的配制 | 第59-60页 |
| 附录 2．棉花基因组DNA抽提方法（CTAB法） | 第60-61页 |
| 附录 3．棉花基因组RNA抽提方法（异硫氰酸胍法） | 第61-62页 |
| 附录 4．总可溶性酚和木质素含量测定 | 第62-63页 |
| 附录 5．Southern杂交步骤 | 第63-67页 |
| 附录 6．实验中用到的引物序列 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
