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蒺藜苜蓿中锌转运体MtHMA2和MtMTP3的鉴定和表达分析

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蒺藜苜蓿中锌转运体MtHMA2和MtMTP3的鉴定和表达分析
论文目录
 
摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略语第11-12页
1 前言第12-28页
  1.1 植物对锌的吸收转运第12-22页
    1.1.1 锌对农业生产的影响第12-13页
    1.1.2 植物对Zn的吸收第13-15页
    1.1.3 ZIP家族转运体第15-16页
    1.1.4 P1B-ATPase家族转运体第16-19页
    1.1.5 CDF家族转运体第19-21页
    1.1.6 Pi和Zn的相互作用第21-22页
  1.2 丛枝菌根对植物ZN吸收影响第22-26页
    1.2.1 菌根真菌简介第22-23页
    1.2.2 丛枝菌根真菌生活史第23-24页
    1.2.3 AMF对植物Zn营养的影响第24-26页
  1.3 实验室前期研究工作第26-27页
  1.4 研究的目的和意义第27-28页
2 材料与方法第28-45页
  2.1 材料第28-30页
    2.1.1 质粒和菌株第28页
    2.1.2 植物材料和AM真菌接种剂第28-29页
    2.1.3 培养基和试剂第29-30页
    2.1.4 主要仪器第30页
  2.2 实验方法第30-45页
    2.2.1 分子生物学基本实验第30-33页
      2.2.1.1 大肠杆菌感受态制备和转化第30-31页
      2.2.1.2 质粒提取第31页
      2.2.1.3 农杆菌感受态制备第31页
      2.2.1.4 胶回收第31-32页
      2.2.1.5 苜蓿总DNA提取第32页
      2.2.1.6 RNA提取第32-33页
      2.2.1.7 cDNA合成第33页
    2.2.2 盆栽和水培试验第33-34页
    2.2.3 菌根侵染率检测第34-35页
    2.2.4 RT-PCR第35-36页
    2.2.5 MtHMA2和MtMTP3开放阅读框扩增第36页
    2.2.6 组织化学定位第36-37页
    2.2.7 超表达质粒构建第37-38页
    2.2.8 苜蓿毛根转化第38页
    2.2.9 GUS酶活性测定第38-40页
      2.2.9.1 MU标准曲线制备第39页
      2.2.9.2 总蛋白提取第39页
      2.2.9.3 蛋白含量的测定第39-40页
    2.2.10 酵母功能互补实验第40-45页
      2.2.10.2 酵母功能互补质粒的构建第41-43页
      2.2.10.3 酵母突变株构建第43页
      2.2.10.5 酵母功能互补实验第43-44页
      2.2.10.4 MtHMA2蛋白C端不同截短的质粒构建第44-45页
3 结果与分析第45-69页
  3.1 苜蓿MtMTP3的鉴定和表达分析第45-53页
    3.1.1 启动子和开放阅读框扩增第45页
    3.1.2 苜蓿MtMTP3基因的生物信息学分析第45-48页
    3.1.3 苜蓿MtMTP3的表达特征第48-49页
    3.1.4 不同重金属处理对MtMTP3表达的影响第49-50页
    3.1.5 接种菌根真菌能抑制MtMTP3基因表达第50-52页
    3.1.6 MtMTP3锌转运功能的验证第52-53页
    3.1.7 小结第53页
  3.2 苜蓿Zn转运体的表达分析第53-54页
  3.3 MtHMA2鉴定和功能分析第54-64页
    3.3.1 MtHMA2生物信息学分析第54-57页
    3.3.2 MtHMA2的表达特征第57-59页
    3.3.3 不同金属处理对MtHMA2表达影响第59页
    3.3.4 MtHMA2的功能验证第59-61页
    3.3.5 MtHMA2的C端功能验证第61-62页
    3.3.6 MtHMA2基因在苜蓿根部的超表达实验第62-63页
    3.3.7 小结第63-64页
  3.4 水稻ZIP家族基因表达分析第64-65页
  3.5 水稻HMA家族基因表达分析第65页
  3.6 水稻Nramp家族基因表达分析第65-66页
  3.7 MYCS元件在OSHMA2中功能分析第66-69页
    3.7.1 OsHMA2启动子中CTTC元件缺失第66-67页
    3.7.2 GUS酶活性测定第67-69页
4 讨论第69-72页
  4.1 苜蓿MtMTP3鉴定和表达调控分析第69-70页
    4.1.1 MtMTP3是一个CDF家族锌转运体第69页
    4.1.2 MtMTP3可能涉及植物体内Zn转运第69-70页
    4.1.3 菌根可能通过Pi效应抑制MtMTP3表达第70页
  4.2 苜蓿MtHMA2鉴定和表达调控分析第70-71页
    4.2.1 MtHMA2是一个P1B-ATPase家族成员第70-71页
    4.2.2 MtHMA2可能参与地上部分Zn转运第71页
    4.2.3 Mt HMA2的C端序列影响其对Zn和Cd的转运第71页
  4.3 AM真菌对植物体锌吸收和转运的机制第71-72页
5 展望第72-74页
参考文献第74-88页
附录第88-92页
致谢第92页

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