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茯苓甾醇C-24甲基转移酶基因克隆与功能验证

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茯苓甾醇C-24甲基转移酶基因克隆与功能验证
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-18页
  1.1 茯苓三萜类物质研究进展第11-14页
    1.1.1 茯苓栽培概述第11页
    1.1.2 茯苓的药理活性概述第11-12页
    1.1.3 茯苓的化学成分第12-13页
    1.1.4 关于茯苓三萜类生物合成概述第13-14页
  1.2 甾醇C-24 甲基转移酶研究进展第14-16页
    1.2.1 茯苓酸研究进展第14页
    1.2.2 萜类骨架的生物合成代谢概述第14-15页
    1.2.3 甾醇C-24 甲基转移酶研究概述第15-16页
  1.3 研究意义与技术路线第16-18页
    1.3.1 研究意义第16-17页
    1.3.2 本研究的技术路线第17-18页
2 茯苓SMT1基因的克隆与序列分析第18-46页
  2.1 材料与方法第18-32页
    2.1.1 试验材料第18页
    2.1.2 菌株和载体第18页
    2.1.3 主要试剂第18-19页
    2.1.4 主要仪器设备第19页
    2.1.5 核酸提取第19-20页
    2.1.6 用于 3’RACE扩增cDNA的合成第20-21页
    2.1.7 用于 5’RACE扩增cDNA的合成第21页
    2.1.8 SMT13’RACE的扩增第21-26页
    2.1.9 SMT15’RACE的扩增第26-29页
    2.1.10 SMT1基因全长扩增第29-30页
    2.1.11 SMT1基因组序列获得第30-31页
    2.1.12 SMT1基因生物信息学分析第31-32页
  2.2 结果与分析第32-45页
    2.2.1 茯苓中总RNA提取和纯度检测第32页
    2.2.2 SMT1基因的分子克隆第32-34页
    2.2.3 SMT1基因结构与启动子分析第34-37页
    2.2.4 SMT1蛋白质系统发育分析第37-38页
    2.2.5 SMT1蛋白质理化性质预测分析第38-42页
    2.2.6 SMT1蛋白质 3D结构模拟与功能分析第42-45页
  2.3 讨论第45-46页
3 茯苓SMT1原核表达及体外酶活验证第46-55页
  3.1 材料与方法第46-49页
    3.1.1 菌株与载体第46页
    3.1.2 主要试剂、耗材第46-47页
    3.1.3 主要仪器设备第47页
    3.1.4 原核表达载体的构建第47-48页
    3.1.5 蛋白表达第48-49页
    3.1.6 SMT1功能的体外酶促反应验证第49页
  3.2 结果与分析第49-53页
    3.2.1 SMT1蛋白的表达第49-51页
    3.2.2 体外重组SMT1的酶促活性第51-53页
  3.3 讨论第53-55页
4 茯苓甾醇转甲基酶在茯苓体内的表达情况第55-60页
  4.1 材料与方法第55-58页
    4.1.1 试验材料第55页
    4.1.2 试剂、耗材第55页
    4.1.3 主要仪器设备第55页
    4.1.4 荧光定量第55-58页
  4.2 结果与分析第58-59页
  4.3 讨论第59-60页
5 结论与展望第60-62页
  5.1 结论第60页
  5.2 展望第60-61页
  5.3 本文创新点第61-62页
参考文献第62-70页
附录第70-77页
附录A 实验中用到的引物第70-72页
附录B SMT1的基因组序列和CDS序列第72-74页
附录C 本研究中所使用培养基、试剂配方第74-76页
附录D 攻读硕士学位期间主要学术成果第76-77页
致谢第77页

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