论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 CXCL8基因的结构 | 第12页 |
| 1.2 CXCL8蛋白的结构 | 第12-13页 |
| 1.3 CXCL8的来源 | 第13-14页 |
| 1.4 CXCL8的生物活性 | 第14-15页 |
| 1.5 CXCL8的受体 | 第15-16页 |
| 1.6 CXCL8与疾病的关系 | 第16-18页 |
| 1.7 CXCR1/2 的拮抗剂 | 第18-19页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-32页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 大白猪CXCL8基因的克隆与测序分析 | 第22-26页 |
| 2.2.1.1 CXCL8引物设计 | 第22页 |
| 2.2.1.2 大白猪肺组织总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 RT-PCR | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的回收 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.1.6 连接与转化 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 阳性质粒的筛选与测序分析 | 第26页 |
| 2.2.2 大白猪PCXCL8的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.3 大白猪PCXCL8原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.3.2 基因的克隆及纯化 | 第27页 |
| 2.2.3.3 目的片段与质粒的酶切、连接、转化 | 第27页 |
| 2.2.3.4 阳性质粒的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重组蛋白的表达纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.4.1 重组蛋白的预表达 | 第28页 |
| 2.2.4.2 重组蛋白的大量表达及纯化 | 第28页 |
| 2.2.4.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 重组蛋白的Western-Blot鉴定 | 第29页 |
| 2.2.5 GST蛋白的原核表达与纯化 | 第29页 |
| 2.2.6 重组蛋白pGEX-PCXCL8体内活性实验 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 动物实验 | 第29页 |
| 2.2.6.2 髓过氧化物酶分析 | 第29-30页 |
| 2.2.6.3 支气管肺泡冲洗液（BALF） | 第30页 |
| 2.2.6.4 组织病理学观察 | 第30页 |
| 2.2.7 突变蛋白G58P的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.8 G58P对大白猪CXCL8体内活性影响的初步探究 | 第31-32页 |
| 2.2.8.1 动物实验 | 第31页 |
| 2.2.8.2 髓过氧化物酶分析 | 第31页 |
| 2.2.8.3 支气管肺泡冲洗液（BALF） | 第31页 |
| 2.2.8.4 组织病理学观察 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-50页 |
| 3.1 大白猪CXCL8基因的克隆与序列分析 | 第32-34页 |
| 3.1.1 PCR扩增目的基因 | 第32页 |
| 3.1.2 菌液PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.3 测序结果的比对及分析 | 第33-34页 |
| 3.2 CXCL8的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.2.1 蛋白信号肽的预测 | 第34页 |
| 3.2.2 蛋白跨膜结构的预测 | 第34-35页 |
| 3.3 大白猪CXCL8蛋白的原核表达与纯化 | 第35-38页 |
| 3.3.1 大白猪CXCL8原核表达载体的构建 | 第35页 |
| 3.3.2 pGEX-PCXCL8重组蛋白的预表达 | 第35-36页 |
| 3.3.3 pGEX-PCXCL8重组蛋白的大量表达和纯化 | 第36页 |
| 3.3.4 pGEX-PCXCL8重组蛋白的Western-Blot鉴定 | 第36-38页 |
| 3.4 GST蛋白的原核表达与纯化 | 第38页 |
| 3.5 重组蛋白pGEX-PCXCL8体内活性实验 | 第38-45页 |
| 3.5.1 髓过氧化物酶分析 | 第38-40页 |
| 3.5.2 支气管肺泡冲洗液（BALF）中性粒细胞计数 | 第40-41页 |
| 3.5.3 组织病理学观察 | 第41-45页 |
| 3.6 G58P对大白猪CXCL8活性影响的初步探究 | 第45-50页 |
| 3.6.1 突变蛋白G58P的制备 | 第45页 |
| 3.6.2 髓过氧化物酶分析 | 第45-46页 |
| 3.6.3 支气管肺泡冲洗液（BALF）中性粒细胞计数 | 第46-47页 |
| 3.6.4 组织病理学观察 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 大白猪CXCL8的序列分析 | 第50页 |
| 4.2 CXCL8的可溶性表达与蛋白纯化 | 第50-51页 |
| 4.3 重组蛋白pGEX-PCXCL8体内活性试验分析 | 第51-52页 |
| 4.4 G58P对大白猪CXCL8活性影响的初步探究 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
