论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 转座子的特性 | 第12-13页 |
| 1.2 SB转座子的结构 | 第13-16页 |
| 1.2.1 SB转座子 | 第13-14页 |
| 1.2.2 SB转座酶 | 第14-15页 |
| 1.2.3 转座的机制 | 第15-16页 |
| 1.3 影响转座效率的因素 | 第16-17页 |
| 1.3.1 转座子的长度 | 第16页 |
| 1.3.2 产物过剩抑制 | 第16页 |
| 1.3.3 宿主因子 | 第16-17页 |
| 1.3.4 DNA甲基化 | 第17页 |
| 1.4 睡美人转座子的应用 | 第17-19页 |
| 1.4.1 转基因 | 第17-18页 |
| 1.4.2 基因治疗 | 第18-19页 |
| 1.4.3 插入诱变 | 第19页 |
| 1.5 鱼类细胞转基因方法 | 第19-20页 |
| 1.6 鱼类转基因细胞的应用 | 第20-21页 |
| 1.6.1 培育转基因鱼 | 第20-21页 |
| 1.6.2 基因功能分析 | 第21页 |
| 1.6.3 环境污染检测 | 第21页 |
| 1.7 本论文的研究意义和目的 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 载体质粒和细胞 | 第23-25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要试剂配制方法 | 第27页 |
| 2.1.5 主要生物学分析工具 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.2.1 SB二元转座子pT2的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.2 SB一元转座子pT2_SB的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.3 细胞的培养和转染 | 第33-35页 |
| 2.2.4 流式细胞仪检测 | 第35页 |
| 2.2.5 细胞总RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.2.6 反转录合成第一链cDNA | 第36页 |
| 2.2.7 半定量RT-PCR | 第36-37页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.9 细胞基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.10 高效热不对称交互式PCR | 第39-42页 |
| 2.2.11 SB转座子转染中华鲟细胞 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-61页 |
| 3.1 SB转座子载体的构建及鉴定 | 第43-48页 |
| 3.1.1 二元转座子pT2的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| 3.1.2 一元转座子pT2_SB的构建及鉴定 | 第45-48页 |
| 3.2 SB转座子系统在MPB和CIK细胞中瞬时转染效率的分析 | 第48-50页 |
| 3.2.1 SB转座子在MPB和CIK细胞中的表达验证 | 第48-49页 |
| 3.2.2 不同SB转座子系统在MPB和CIK细胞中的瞬时转染效率 | 第49-50页 |
| 3.3 不同SB转座子系统在MPB和CIK细胞中整合效率的分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 药物筛选后SB转座子在MPB和CIK细胞中的表达验证 | 第50-51页 |
| 3.3.2 不同SB转座子系统在MPB和CIK细胞的整合效率 | 第51-53页 |
| 3.3.3 DsRed相对荧光强度 | 第53页 |
| 3.4 DsRed相对表达量 | 第53-55页 |
| 3.4.1 MPB和CIK细胞中DsRed的检测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 MPB和CIK细胞中DsRed的相对表达量 | 第54-55页 |
| 3.5 SB转座子插入位点的分析 | 第55-59页 |
| 3.5.1 hi TAIL-PCR扩增转座子插入位点的侧翼序列 | 第55-57页 |
| 3.5.2 SB转座子在青鱼基因组中插入位点分析 | 第57-58页 |
| 3.5.3 SB转座子在草鱼基因组中插入位点分析 | 第58-59页 |
| 3.6 SB转座子在中华鲟ASM细胞中的整合效率 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 SB转座子与转座酶最佳转染比例的探讨 | 第61-62页 |
| 4.2 SB一元转座子和二元转座子整合效率的探讨 | 第62-63页 |
| 4.3 SB转座子插入位点的探讨 | 第63-64页 |
| 4.4 提高SB转座子整合效率的探讨 | 第64页 |
| 4.5 SB转座子在中华鲟细胞的应用 | 第64-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
