论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 牛传染性鼻气管炎研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 牛传染性鼻气管炎发展简史 | 第10页 |
| 1.1.2 病原学 | 第10-12页 |
| 1.1.3 牛传染性鼻气管炎的流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.4 牛传染性鼻气管炎的防控 | 第13-14页 |
| 1.1.5 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白研究进展 | 第14页 |
| 1.2 单链抗体的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 单链抗体基因的构建 | 第15页 |
| 1.2.2 单链抗体的表达 | 第15页 |
| 1.2.3 单链抗体的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 单链抗体在牛传染性鼻气管炎防控中的应用 | 第16-18页 |
| 第二章 单链抗体基因的克隆 | 第18-25页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 载体和细胞 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 杂交瘤细胞总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 扩增引物的设计 | 第20页 |
| 2.2.4 VH及VL基因的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.5 目的基因的回收 | 第21页 |
| 2.2.6 VH及VL目的片段的连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.2.7 重组克隆载体的鉴定 | 第22页 |
| 2.2.8 重组质粒的提取 | 第22页 |
| 2.2.9 重叠延伸PCR构建ScFv基因 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-24页 |
| 2.3.1 VH及VL扩增结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 重叠延伸PCR扩增结果 | 第23页 |
| 2.3.3 单链抗体基因序列的测定及三级结构预测 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 单链抗体基因的表达及其产物的纯化 | 第25-44页 |
| 3.1 材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 载体和细胞 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第25页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 3.2 方法 | 第27-35页 |
| 3.2.1 单链抗体在大肠杆菌的表达 | 第27-30页 |
| 3.2.2 单链抗体在昆虫细胞的表达 | 第30-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 pLB-VH-VL及pET28a的酶切回收 | 第35页 |
| 3.3.2 阳性表达菌的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.3 单链抗体在大肠杆菌的表达 | 第36-37页 |
| 3.3.4 单链抗体表达诱导剂最佳浓度的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.5 Western-blot鉴定大肠杆菌表达的单链抗体 | 第38页 |
| 3.3.6 大肠杆菌表达的单链抗体的纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.7 pFB-VH-VL重组质粒的构建 | 第39页 |
| 3.3.8 重组杆粒rBacmid VH--VL的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.9 Western blot检测昆虫细胞表达的单链抗体蛋白 | 第40-41页 |
| 3.3.10 昆虫细胞表达单链抗体表达形式的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.11 昆虫细胞表达的单链抗体的纯化 | 第42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 单链抗体的特性鉴定 | 第44-53页 |
| 4.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.1 病毒和细胞 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 实验器材 | 第44页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 单链抗体结合重组IBRV gD蛋白的Western blot | 第44-45页 |
| 4.2.2 单链抗体结合MDBK细胞中的IBRV的IFA | 第45页 |
| 4.2.3 单链抗捕获IBRV抗原的ELISA | 第45-46页 |
| 4.2.4 单链抗体特异性的鉴定 | 第46页 |
| 4.2.5 单链抗体抑制IBRV的病毒中和试验 | 第46页 |
| 4.2.6 单链抗体抑制IBRV的噬斑减数试验 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-52页 |
| 4.3.1 单链抗体结合重组IBRV gD蛋白 | 第47-48页 |
| 4.3.2 单链抗体识别MDBK细胞中的IBRV | 第48-49页 |
| 4.3.3 单链抗体捕获IBRV抗原 | 第49-50页 |
| 4.3.4 单链抗体特异性的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3.5 单链抗体抑制IBRV | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60页 |
