论文目录 | |
| 研究课题来源 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 肠病毒简介 | 第11-17页 |
| 1.1.1 猪肠病毒的命名和分类的变化 | 第11-13页 |
| 1.1.2 猪肠病毒的形态特征及理化性质 | 第13-14页 |
| 1.1.3 猪肠病毒的基因结构 | 第14-15页 |
| 1.1.4 猪肠病毒的实验室培养 | 第15页 |
| 1.1.5 流行病学及临床症状 | 第15-16页 |
| 1.1.6 病理变化 | 第16-17页 |
| 1.1.7 诊断方法 | 第17页 |
| 1.1.8 防治手段 | 第17页 |
| 1.2 卵黄抗体技术简介 | 第17-20页 |
| 1.2.1 IgY的分子结构特性 | 第17-18页 |
| 1.2.2 IgY的稳定性 | 第18页 |
| 1.2.3 卵黄抗体的优势分析 | 第18页 |
| 1.2.4 IgY抗体的纯化方法 | 第18-19页 |
| 1.2.5 抗PEDV卵黄抗体在仔猪腹泻上的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 猪肠病毒RT-PCR检测方法的建立和应用 | 第21-29页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 粪便样品的采集 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器和设备 | 第21页 |
| 2.1.4 常用试剂配置 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.2 样品处理与RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第23页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.5 目的片段的胶回收 | 第23-24页 |
| 2.2.6 片段的T-A克隆 | 第24页 |
| 2.2.6.1 pMD~(TM)18-T载体连接 | 第24页 |
| 2.2.6.2 连接产物的转化 | 第24页 |
| 2.2.6.3 重组菌扩大培养 | 第24页 |
| 2.2.7 重组菌鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 江西省猪群肠病毒感染流行情况调查 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 退火温度优化电泳图结果 | 第24-25页 |
| 2.3.2 野猪粪检样本的PCR结果 | 第25-26页 |
| 2.3.3 菌液PCR电泳结果 | 第26页 |
| 2.3.4 菌液测序结果 | 第26-27页 |
| 2.3.5 江西省猪群中猪肠病毒感染率测定结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 猪肠病毒基因组全长的测序与序列分析 | 第29-41页 |
| 3.1 材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 试剂 | 第29页 |
| 3.1.2 仪器和设备 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第30页 |
| 3.2.2 样品RNA的处理 | 第30页 |
| 3.2.3 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第30-31页 |
| 3.2.4 各个片段PCR扩增 | 第31页 |
| 3.2.5 扩增序列的T-A克隆 | 第31页 |
| 3.2.5.1 pMDTM18-T载体连接 | 第31页 |
| 3.2.5.2 连接产物的转化 | 第31页 |
| 3.2.5.3 重组菌扩大培养 | 第31页 |
| 3.2.5.4 重组菌液鉴定 | 第31页 |
| 3.2.6 PEV全基因组序列拼接与分析 | 第31-32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-40页 |
| 3.3.1 PEV全长扩增电泳图结果 | 第32页 |
| 3.3.2 PEV全基因组序列分析 | 第32页 |
| 3.3.3 PEV PEV同源性及遗传进化分析 | 第32-37页 |
| 3.3.4 猪肠病毒江西株全基因组核苷酸的变异分析 | 第37-39页 |
| 3.3.5 猪肠病毒参考株和江西株VP3氨基酸序列疏水性和抗原性分析 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 三种卵黄抗体提取方法的比较及IgY的理化性质研究 | 第41-55页 |
| 4.1 材料 | 第41-43页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第41页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 4.1.3 试剂 | 第41-43页 |
| 4.1.3.1 主要的试剂配置 | 第41-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 抗原的制备 | 第43页 |
| 4.2.2 细胞的培养 | 第43-44页 |
| 4.2.1.1 Vero-81 细胞复苏和传代 | 第43页 |
| 4.2.2.2 细胞接毒 | 第43-44页 |
| 4.2.2.3 病毒的浓缩 | 第44页 |
| 4.2.3 蛋鸡的饲养与免疫 | 第44页 |
| 4.2.4 鸡蛋的收集 | 第44页 |
| 4.2.5 卵黄抗体分离和纯化三种方法的比较 | 第44-46页 |
| 4.2.5.1 酸化水提法 | 第44页 |
| 4.2.5.2 饱和硫酸铵法步骤 | 第44-45页 |
| 4.2.5.3 PEG-6000 法提取IgY步骤 | 第45-46页 |
| 4.2.6 透析袋的处理 | 第46页 |
| 4.2.7 IgY的蛋白含量测定 | 第46页 |
| 4.2.8 SDS-PAGE分析卵黄抗体纯度 | 第46-47页 |
| 4.2.8.15%浓缩胶与 10%分离胶的配置 | 第46页 |
| 4.2.8.2 SDS-PAGE操作步骤 | 第46-47页 |
| 4.2.9 使用间接ELISA方法检测卵黄抗体滴度 | 第47页 |
| 4.2.9.1 抗原包被浓度及二抗最佳稀释倍数的确定 | 第47页 |
| 4.2.9.2 ELISA检测不同提纯方法提取的IgY效价 | 第47页 |
| 4.2.10 卵黄抗体理化性质及保护剂研究 | 第47-48页 |
| 4.2.10.1 温度对IgY的影响检测 | 第47页 |
| 4.2.10.2 pH对IgY抗体的影响 | 第47-48页 |
| 4.2.10.3 酸性条件下蔗糖、葡萄糖和硫糖铝对卵黄抗体保护作用 | 第48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 蛋鸡的免疫与鸡蛋的收集 | 第48页 |
| 4.3.2 不同卵黄抗体的提取方法的比较 | 第48-50页 |
| 4.3.2.1 三种提取方法提纯的IgY理化性质比较 | 第48-49页 |
| 4.3.2.2 三种方法提取IgYSDS-PAGE分析结果 | 第49页 |
| 4.3.2.3 抗原包被浓度以及二抗稀释倍数的确定 | 第49-50页 |
| 4.3.2.4 测定三种不同方法提取IgY效价 | 第50页 |
| 4.3.3 温度对卵黄抗体的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.4 pH对卵黄抗体的影响 | 第51页 |
| 4.3.5 酸性条件下蔗糖、葡萄糖和硫糖铝对卵黄抗体的保护作用 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
