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在香蕉镰刀菌侵染下香蕉钙依赖蛋白激酶基因(MaCDPK4)的功能分析

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在香蕉镰刀菌侵染下香蕉钙依赖蛋白激酶基因(MaCDPK4)的功能分析
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 前言第10-19页
  1.1 香蕉的概念及所受灾害第10页
    1.1.1 香蕉简介第10页
    1.1.2 香蕉植株丰富的生物多样性第10页
    1.1.3 香蕉枯萎病灾害第10页
  1.2 钙依赖蛋白激酶概念概述第10-13页
    1.2.1 钙依赖蛋白激酶概念第10-11页
    1.2.2 CDPK结构与调控第11页
    1.2.3 CDPK的表达与定位第11-12页
    1.2.4 底物特异性第12-13页
  1.3 CDPKs功能的研究进展第13-17页
    1.3.1 CDPKs在免疫信号途径中被微生物病原体激活第13页
    1.3.2 CDPKs在过氧化与细胞死亡中的作用第13-14页
    1.3.3 对食草动物攻击与受伤的响应第14-15页
    1.3.4 CDPKs调控ABA基因的表达和参与干旱和盐胁迫信号途径第15页
    1.3.5 CDPKs在干旱与盐胁迫信号途径中的代谢和转运调控第15-16页
    1.3.6 调控气孔的活动第16-17页
    1.3.7 低温耐性第17页
  1.4 本研究的目的和意义第17-18页
  1.5 技术路线第18-19页
2 材料与方法第19-28页
  2.1 材料与试剂第19-20页
    2.1.1 材料第19页
    2.1.2 试剂第19页
    2.1.3 所需引物第19-20页
    2.1.4 所用仪器第20页
  2.2 步骤与方法第20-28页
    2.2.1 MaCDPK4酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活及毒性检测第20-22页
      2.2.1.1 PCR扩增MaCDPK4第20页
      2.2.1.2 PCR产物纯化回收和酶切连接第20-21页
      2.2.1.3 质粒转化大肠杆菌和扩增第21页
      2.2.1.4 重组质粒pGBKT-7-MaCDPK4的鉴定第21页
      2.2.1.5 酵母感受态细胞的制备第21-22页
      2.2.1.6 重组质粒pGBKT-7-MaCDPK4的自激活及毒性检测第22页
    2.2.2 香蕉在FOC4侵染后根的cDNA文库的构建第22-23页
      2.2.2.1 香蕉在FOC4侵染后根的总RNA的提取第22页
      2.2.2.2 cDNA第一链的合成第22-23页
      2.2.2.3 双链cDNA的合成第23页
      2.2.2.4 纯化柱纯化双链cDNA第23页
    2.2.3 酵母双杂交及阳性克隆的筛选与验证第23-25页
      2.2.3.1 酵母感受态的制备第24页
      2.2.3.2 酵母共转化筛选pGBKT-7-MaCDPK4相互作用分子第24页
      2.2.3.3 提取酵母菌质粒及PCR鉴定与测序第24页
      2.2.3.4 互作蛋白基因的载体构建第24-25页
      2.2.3.5 酵母双杂交验证互作第25页
    2.2.4 香蕉CDPK4基因过表达载体的构建及遗传转化第25-27页
      2.2.4.1 构建重组质粒PVKH-MaCDPK4第25页
      2.2.4.2 农杆菌感受态的制备第25-26页
      2.2.4.3 转化农杆菌第26页
      2.2.4.4 农杆菌介导的遗传转化第26-27页
    2.2.5 转基因烟草的筛选及鉴定第27页
      2.2.5.1 烟草叶片基因组DNA的提取第27页
      2.2.5.2 转基因T1代植株PCR扩增检测第27页
      2.2.5.3 潮霉素筛选培养基筛选T1代种子第27页
      2.2.5.4 转基因烟草T2代的分子鉴定第27页
    2.2.6 FOC4处理对转基因烟草生长的影响和烟草基因的表达分析第27-28页
      2.2.6.1 FOC4处理烟草幼苗第27页
      2.2.6.2 烟草幼苗根的荧光检测第27页
      2.2.6.3 FOC4处理下烟草基因的表达分析第27-28页
3 结果与分析第28-42页
  3.1 诱饵载体pGBKT-7-MaCDPK4的构建及其自激活及毒性检测第28-29页
    3.1.1 诱饵载体pGBKT-7-MaCDPK4的酶切及PCR检测第28页
    3.1.2 自激活及毒性检测第28-29页
  3.2 FOC4处理的香蕉根系cDNA文库的构建及纯化与检测第29-30页
    3.2.1 提取FOC4处理下香蕉根的总RNA第29页
    3.2.2 香蕉根cDNA文库的构建及纯化与检测第29-30页
  3.3 酵母双杂交第30-31页
  3.4 阳性克隆的筛选及验证第31-32页
    3.4.1 阳性克隆的筛选第31页
    3.4.2 互作蛋白基因载体的构建第31-32页
    3.4.3 酵母双杂交互作验证第32页
  3.5 MaCDPK4植物表达载体的构建及检测第32页
  3.6 植物表达载体转入农杆菌第32-33页
  3.7 转基因烟草第33-35页
    3.7.1 T1抗性苗筛选第33页
    3.7.2 转基因烟草的PCR检测第33-34页
    3.7.3 转基因烟草的RT-PCR检测第34页
    3.7.4 T2代转基因烟草潮霉素筛选第34页
    3.7.5 T3代转基因烟草纯合株系的获得第34-35页
  3.8 FOC4处理下转基因烟草的表型及相关抗病基因的表达分析第35-42页
    3.8.1 FOC4处理下转基因烟草的表型第35-37页
    3.8.2 FOC4处理下烟草根的显微镜下观察第37-39页
    3.8.3 FOC4处理下相关抗病基因的表达分析第39-42页
4 讨论第42-44页
  4.1 MaCDPK4转基因烟草对香蕉枯萎病菌抵抗能力增强第42-43页
  4.2 酵母双杂交获得与MaCDPK4互作的蛋白第43-44页
5 结论第44-45页
参考文献第45-50页
致谢第50页

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