论文目录 | |
摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-10页 |
1 前言 | 第10-19页 |
1.1 香蕉的概念及所受灾害 | 第10页 |
1.1.1 香蕉简介 | 第10页 |
1.1.2 香蕉植株丰富的生物多样性 | 第10页 |
1.1.3 香蕉枯萎病灾害 | 第10页 |
1.2 钙依赖蛋白激酶概念概述 | 第10-13页 |
1.2.1 钙依赖蛋白激酶概念 | 第10-11页 |
1.2.2 CDPK结构与调控 | 第11页 |
1.2.3 CDPK的表达与定位 | 第11-12页 |
1.2.4 底物特异性 | 第12-13页 |
1.3 CDPKs功能的研究进展 | 第13-17页 |
1.3.1 CDPKs在免疫信号途径中被微生物病原体激活 | 第13页 |
1.3.2 CDPKs在过氧化与细胞死亡中的作用 | 第13-14页 |
1.3.3 对食草动物攻击与受伤的响应 | 第14-15页 |
1.3.4 CDPKs调控ABA基因的表达和参与干旱和盐胁迫信号途径 | 第15页 |
1.3.5 CDPKs在干旱与盐胁迫信号途径中的代谢和转运调控 | 第15-16页 |
1.3.6 调控气孔的活动 | 第16-17页 |
1.3.7 低温耐性 | 第17页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
1.5 技术路线 | 第18-19页 |
2 材料与方法 | 第19-28页 |
2.1 材料与试剂 | 第19-20页 |
2.1.1 材料 | 第19页 |
2.1.2 试剂 | 第19页 |
2.1.3 所需引物 | 第19-20页 |
2.1.4 所用仪器 | 第20页 |
2.2 步骤与方法 | 第20-28页 |
2.2.1 MaCDPK4酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活及毒性检测 | 第20-22页 |
2.2.1.1 PCR扩增MaCDPK4 | 第20页 |
2.2.1.2 PCR产物纯化回收和酶切连接 | 第20-21页 |
2.2.1.3 质粒转化大肠杆菌和扩增 | 第21页 |
2.2.1.4 重组质粒pGBKT-7-MaCDPK4的鉴定 | 第21页 |
2.2.1.5 酵母感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
2.2.1.6 重组质粒pGBKT-7-MaCDPK4的自激活及毒性检测 | 第22页 |
2.2.2 香蕉在FOC4侵染后根的cDNA文库的构建 | 第22-23页 |
2.2.2.1 香蕉在FOC4侵染后根的总RNA的提取 | 第22页 |
2.2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
2.2.2.3 双链cDNA的合成 | 第23页 |
2.2.2.4 纯化柱纯化双链cDNA | 第23页 |
2.2.3 酵母双杂交及阳性克隆的筛选与验证 | 第23-25页 |
2.2.3.1 酵母感受态的制备 | 第24页 |
2.2.3.2 酵母共转化筛选pGBKT-7-MaCDPK4相互作用分子 | 第24页 |
2.2.3.3 提取酵母菌质粒及PCR鉴定与测序 | 第24页 |
2.2.3.4 互作蛋白基因的载体构建 | 第24-25页 |
2.2.3.5 酵母双杂交验证互作 | 第25页 |
2.2.4 香蕉CDPK4基因过表达载体的构建及遗传转化 | 第25-27页 |
2.2.4.1 构建重组质粒PVKH-MaCDPK4 | 第25页 |
2.2.4.2 农杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
2.2.4.3 转化农杆菌 | 第26页 |
2.2.4.4 农杆菌介导的遗传转化 | 第26-27页 |
2.2.5 转基因烟草的筛选及鉴定 | 第27页 |
2.2.5.1 烟草叶片基因组DNA的提取 | 第27页 |
2.2.5.2 转基因T1代植株PCR扩增检测 | 第27页 |
2.2.5.3 潮霉素筛选培养基筛选T1代种子 | 第27页 |
2.2.5.4 转基因烟草T2代的分子鉴定 | 第27页 |
2.2.6 FOC4处理对转基因烟草生长的影响和烟草基因的表达分析 | 第27-28页 |
2.2.6.1 FOC4处理烟草幼苗 | 第27页 |
2.2.6.2 烟草幼苗根的荧光检测 | 第27页 |
2.2.6.3 FOC4处理下烟草基因的表达分析 | 第27-28页 |
3 结果与分析 | 第28-42页 |
3.1 诱饵载体pGBKT-7-MaCDPK4的构建及其自激活及毒性检测 | 第28-29页 |
3.1.1 诱饵载体pGBKT-7-MaCDPK4的酶切及PCR检测 | 第28页 |
3.1.2 自激活及毒性检测 | 第28-29页 |
3.2 FOC4处理的香蕉根系cDNA文库的构建及纯化与检测 | 第29-30页 |
3.2.1 提取FOC4处理下香蕉根的总RNA | 第29页 |
3.2.2 香蕉根cDNA文库的构建及纯化与检测 | 第29-30页 |
3.3 酵母双杂交 | 第30-31页 |
3.4 阳性克隆的筛选及验证 | 第31-32页 |
3.4.1 阳性克隆的筛选 | 第31页 |
3.4.2 互作蛋白基因载体的构建 | 第31-32页 |
3.4.3 酵母双杂交互作验证 | 第32页 |
3.5 MaCDPK4植物表达载体的构建及检测 | 第32页 |
3.6 植物表达载体转入农杆菌 | 第32-33页 |
3.7 转基因烟草 | 第33-35页 |
3.7.1 T1抗性苗筛选 | 第33页 |
3.7.2 转基因烟草的PCR检测 | 第33-34页 |
3.7.3 转基因烟草的RT-PCR检测 | 第34页 |
3.7.4 T2代转基因烟草潮霉素筛选 | 第34页 |
3.7.5 T3代转基因烟草纯合株系的获得 | 第34-35页 |
3.8 FOC4处理下转基因烟草的表型及相关抗病基因的表达分析 | 第35-42页 |
3.8.1 FOC4处理下转基因烟草的表型 | 第35-37页 |
3.8.2 FOC4处理下烟草根的显微镜下观察 | 第37-39页 |
3.8.3 FOC4处理下相关抗病基因的表达分析 | 第39-42页 |
4 讨论 | 第42-44页 |
4.1 MaCDPK4转基因烟草对香蕉枯萎病菌抵抗能力增强 | 第42-43页 |
4.2 酵母双杂交获得与MaCDPK4互作的蛋白 | 第43-44页 |
5 结论 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-50页 |
致谢 | 第50页 |