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水杨酸应答新基因OsAAA1在水稻广谱抗病反应中的分子机理初步研究

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水杨酸应答新基因OsAAA1在水稻广谱抗病反应中的分子机理初步研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-11页
第一章 文献综述第11-19页
  1.1 植物的诱导抗性第11-12页
    1.1.1 水稻稻瘟病和白叶枯病第11页
    1.1.2 植物的诱导抗性概述第11-12页
  1.2 AAA-ATPase基因家族概述第12-17页
    1.2.1 AAA-ATPase基因家族的起源及结构特点第12-16页
    1.2.2 AAA-ATPase基因家族的功能概述第16-17页
      1.2.2.1 在蛋白酶体中的作用第16页
      1.2.2.2 在过氧化物酶体中的作用第16-17页
      1.2.2.3 植物中AAA-ATPase基因的研究进展第17页
  1.3 研究目的及内容第17-19页
第二章 OsAAA1基因的表达模式分析第19-28页
  2.1 前言第19页
  2.2 实验材料第19-20页
    2.2.1 水稻品种第19页
    2.2.2 主要试剂第19页
    2.2.3 主要仪器设备第19-20页
    2.2.4 qRT-PCR引物第20页
  2.3 实验方法第20-24页
    2.3.1 日本晴幼苗的培育第20-21页
    2.3.2 日本晴不同时期不同组织采样第21页
    2.3.3 非生物因素胁迫处理第21页
    2.3.4 水稻总RNA的提取第21-22页
    2.3.5 cDNA的合成第22-23页
    2.3.6 表达量分析第23页
    2.3.7 相对定量分析第23-24页
  2.4 实验结果第24-26页
    2.4.1 日本晴不同时期不同组织OsAAA1基因的的表达量分析第24页
    2.4.2 非生物逆境胁迫处理后OsAAA1基因的表达量分析第24-26页
  2.5 讨论第26-28页
第三章 OsAAA1超表达转基因水稻表达谱基因芯片的初步分析第28-42页
  3.1 前言第28页
  3.2 实验材料第28-30页
    3.2.1 水稻品种和稻瘟病菌菌株第28页
    3.2.2 主要试剂第28-29页
    3.2.3 MS培养基的成分及配制方法第29页
    3.2.4 主要仪器设备第29-30页
  3.3 实验方法第30-31页
    3.3.1 水稻表达谱基因芯片样品准备第30-31页
      3.3.1.1 水稻幼苗的培育第30页
      3.3.1.2 稻瘟病菌接种第30-31页
    3.3.2 水稻表达谱基因芯片杂交实验第31页
    3.3.3 关键基因表达量的验证第31页
  3.4 实验结果第31-40页
    3.4.1 转基因植株中差异基因的筛选第31-33页
    3.4.2 趋势显著性分析第33-37页
    3.4.3 时间序列的共表达网络分析第37-39页
    3.4.4 关键基因的表达量验证第39-40页
      3.4.4.1 关键基因qRT-PCR引物设计第39页
      3.4.4.2 关键基因的qRT-PCR验证第39-40页
  3.5 讨论第40-42页
第四章 OsAAA1互作蛋白的初步筛选第42-63页
  4.1 前言第42页
  4.2 实验材料第42-45页
    4.2.1 载体与菌株第42页
    4.2.2 主要试剂第42-44页
      4.2.2.1 生化试剂第42-43页
      4.2.2.2 载体构建相关试剂第43页
      4.2.2.3 酵母双杂交相关试剂第43页
      4.2.2.4 蛋白表达及Pull-down相关试剂第43-44页
    4.2.3 主要仪器设备第44-45页
  4.3 实验方法第45-54页
    4.3.1 水稻OsAAA1基因酵母双杂交载体构建第45-48页
      4.3.1.1 OsAAA1基因结构域分析第45页
      4.3.1.2 OsAAA1基因的扩增第45-46页
      4.3.1.3 目的片断和载体的双酶切第46页
      4.3.1.4 目的片断和载体的连接第46-47页
      4.3.1.5 连接产物转化DH5α 感受态细胞第47页
      4.3.1.6 阳性克隆的PCR及酶切鉴定第47-48页
    4.3.2 OsSSI2基因的酵母双杂交载体构建第48-49页
      4.3.2.1 OsSSI2基因的扩增第48-49页
      4.3.2.2 目的片断和载体的双酶切、连接、转化、鉴定第49页
    4.3.3 水稻OsAAA1与WRKY家族以及抗病基因的酵母双杂交第49-50页
      4.3.3.1 酵母感受态细胞的制备第49-50页
      4.3.3.2 质粒DNA转化至酵母感受态细胞第50页
    4.3.4 pGEX-6P1-OsSSI2原核表达载体的构建第50-51页
    4.3.5 重组蛋白的原核表达第51-52页
      4.3.5.1 重组蛋白的诱导表达第51页
      4.3.5.2 重组蛋白的诱导表达条件的优化第51-52页
      4.3.5.3 重组蛋白的SDS-PAGE检测第52页
      4.3.5.4 重组蛋白的Western Blot检测第52页
    4.3.6 OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白GST Pull-down实验第52-53页
    4.3.7 水稻OsAAA1与OsSSI2的BiFC载体构建第53-54页
      4.3.7.1 BiFC载体构建引物设计第53页
      4.3.7.2 Gateway入门载体的构建第53-54页
      4.3.7.3 pSPYN(C)E-OsAAA1F/N/C、OsSSI2F/C载体的构建第54页
  4.4 实验结果第54-61页
    4.4.1 水稻OsAAA1基因酵母双杂交载体的构建第54-55页
    4.4.2 水稻OsSSI2基因酵母双杂交载体的构建第55-56页
    4.4.3 水稻OsAAA1基因的酵母双杂交第56-57页
      4.4.3.1 OsAAA1与WRKY家族以及抗病基因酵母双杂交第56-57页
      4.4.3.2 OsAAA1和OsSSI2的酵母双杂交第57页
    4.4.4 水稻OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白的Pull-down第57-60页
      4.4.4.1 pGEX-6P1-OsSSI2原核表达载体的克隆第57-58页
      4.4.4.2 重组蛋白的SDS-PAGE检测第58-59页
      4.4.4.3 重组蛋白的Western blot检测第59页
      4.4.4.4 OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白GST Pull-down实验第59-60页
    4.4.5 水稻OsAAA1与OsSSI2的BiFC载体构建第60-61页
      4.4.5.1 BiFC Gateway入门载体的构建(BP反应及阳性克隆的鉴定)第60-61页
      4.4.5.2 BiFC重组载体的构建(LR反应及阳性克隆的鉴定)第61页
  4.5 讨论第61-63页
参考文献第63-68页
致谢第68-69页
在读期间发表的学术论文第69页
参与的科研课题第69页

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