论文目录 | |
摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-19页 |
1.1 植物的诱导抗性 | 第11-12页 |
1.1.1 水稻稻瘟病和白叶枯病 | 第11页 |
1.1.2 植物的诱导抗性概述 | 第11-12页 |
1.2 AAA-ATPase基因家族概述 | 第12-17页 |
1.2.1 AAA-ATPase基因家族的起源及结构特点 | 第12-16页 |
1.2.2 AAA-ATPase基因家族的功能概述 | 第16-17页 |
1.2.2.1 在蛋白酶体中的作用 | 第16页 |
1.2.2.2 在过氧化物酶体中的作用 | 第16-17页 |
1.2.2.3 植物中AAA-ATPase基因的研究进展 | 第17页 |
1.3 研究目的及内容 | 第17-19页 |
第二章 OsAAA1基因的表达模式分析 | 第19-28页 |
2.1 前言 | 第19页 |
2.2 实验材料 | 第19-20页 |
2.2.1 水稻品种 | 第19页 |
2.2.2 主要试剂 | 第19页 |
2.2.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
2.2.4 qRT-PCR引物 | 第20页 |
2.3 实验方法 | 第20-24页 |
2.3.1 日本晴幼苗的培育 | 第20-21页 |
2.3.2 日本晴不同时期不同组织采样 | 第21页 |
2.3.3 非生物因素胁迫处理 | 第21页 |
2.3.4 水稻总RNA的提取 | 第21-22页 |
2.3.5 cDNA的合成 | 第22-23页 |
2.3.6 表达量分析 | 第23页 |
2.3.7 相对定量分析 | 第23-24页 |
2.4 实验结果 | 第24-26页 |
2.4.1 日本晴不同时期不同组织OsAAA1基因的的表达量分析 | 第24页 |
2.4.2 非生物逆境胁迫处理后OsAAA1基因的表达量分析 | 第24-26页 |
2.5 讨论 | 第26-28页 |
第三章 OsAAA1超表达转基因水稻表达谱基因芯片的初步分析 | 第28-42页 |
3.1 前言 | 第28页 |
3.2 实验材料 | 第28-30页 |
3.2.1 水稻品种和稻瘟病菌菌株 | 第28页 |
3.2.2 主要试剂 | 第28-29页 |
3.2.3 MS培养基的成分及配制方法 | 第29页 |
3.2.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
3.3 实验方法 | 第30-31页 |
3.3.1 水稻表达谱基因芯片样品准备 | 第30-31页 |
3.3.1.1 水稻幼苗的培育 | 第30页 |
3.3.1.2 稻瘟病菌接种 | 第30-31页 |
3.3.2 水稻表达谱基因芯片杂交实验 | 第31页 |
3.3.3 关键基因表达量的验证 | 第31页 |
3.4 实验结果 | 第31-40页 |
3.4.1 转基因植株中差异基因的筛选 | 第31-33页 |
3.4.2 趋势显著性分析 | 第33-37页 |
3.4.3 时间序列的共表达网络分析 | 第37-39页 |
3.4.4 关键基因的表达量验证 | 第39-40页 |
3.4.4.1 关键基因qRT-PCR引物设计 | 第39页 |
3.4.4.2 关键基因的qRT-PCR验证 | 第39-40页 |
3.5 讨论 | 第40-42页 |
第四章 OsAAA1互作蛋白的初步筛选 | 第42-63页 |
4.1 前言 | 第42页 |
4.2 实验材料 | 第42-45页 |
4.2.1 载体与菌株 | 第42页 |
4.2.2 主要试剂 | 第42-44页 |
4.2.2.1 生化试剂 | 第42-43页 |
4.2.2.2 载体构建相关试剂 | 第43页 |
4.2.2.3 酵母双杂交相关试剂 | 第43页 |
4.2.2.4 蛋白表达及Pull-down相关试剂 | 第43-44页 |
4.2.3 主要仪器设备 | 第44-45页 |
4.3 实验方法 | 第45-54页 |
4.3.1 水稻OsAAA1基因酵母双杂交载体构建 | 第45-48页 |
4.3.1.1 OsAAA1基因结构域分析 | 第45页 |
4.3.1.2 OsAAA1基因的扩增 | 第45-46页 |
4.3.1.3 目的片断和载体的双酶切 | 第46页 |
4.3.1.4 目的片断和载体的连接 | 第46-47页 |
4.3.1.5 连接产物转化DH5α 感受态细胞 | 第47页 |
4.3.1.6 阳性克隆的PCR及酶切鉴定 | 第47-48页 |
4.3.2 OsSSI2基因的酵母双杂交载体构建 | 第48-49页 |
4.3.2.1 OsSSI2基因的扩增 | 第48-49页 |
4.3.2.2 目的片断和载体的双酶切、连接、转化、鉴定 | 第49页 |
4.3.3 水稻OsAAA1与WRKY家族以及抗病基因的酵母双杂交 | 第49-50页 |
4.3.3.1 酵母感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
4.3.3.2 质粒DNA转化至酵母感受态细胞 | 第50页 |
4.3.4 pGEX-6P1-OsSSI2原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
4.3.5 重组蛋白的原核表达 | 第51-52页 |
4.3.5.1 重组蛋白的诱导表达 | 第51页 |
4.3.5.2 重组蛋白的诱导表达条件的优化 | 第51-52页 |
4.3.5.3 重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第52页 |
4.3.5.4 重组蛋白的Western Blot检测 | 第52页 |
4.3.6 OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白GST Pull-down实验 | 第52-53页 |
4.3.7 水稻OsAAA1与OsSSI2的BiFC载体构建 | 第53-54页 |
4.3.7.1 BiFC载体构建引物设计 | 第53页 |
4.3.7.2 Gateway入门载体的构建 | 第53-54页 |
4.3.7.3 pSPYN(C)E-OsAAA1F/N/C、OsSSI2F/C载体的构建 | 第54页 |
4.4 实验结果 | 第54-61页 |
4.4.1 水稻OsAAA1基因酵母双杂交载体的构建 | 第54-55页 |
4.4.2 水稻OsSSI2基因酵母双杂交载体的构建 | 第55-56页 |
4.4.3 水稻OsAAA1基因的酵母双杂交 | 第56-57页 |
4.4.3.1 OsAAA1与WRKY家族以及抗病基因酵母双杂交 | 第56-57页 |
4.4.3.2 OsAAA1和OsSSI2的酵母双杂交 | 第57页 |
4.4.4 水稻OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白的Pull-down | 第57-60页 |
4.4.4.1 pGEX-6P1-OsSSI2原核表达载体的克隆 | 第57-58页 |
4.4.4.2 重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第58-59页 |
4.4.4.3 重组蛋白的Western blot检测 | 第59页 |
4.4.4.4 OsAAA1蛋白与OsSSI2蛋白GST Pull-down实验 | 第59-60页 |
4.4.5 水稻OsAAA1与OsSSI2的BiFC载体构建 | 第60-61页 |
4.4.5.1 BiFC Gateway入门载体的构建(BP反应及阳性克隆的鉴定) | 第60-61页 |
4.4.5.2 BiFC重组载体的构建(LR反应及阳性克隆的鉴定) | 第61页 |
4.5 讨论 | 第61-63页 |
参考文献 | 第63-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
在读期间发表的学术论文 | 第69页 |
参与的科研课题 | 第69页 |