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吕氏泰勒虫TlSP在毕赤酵母的分泌表达及重组TlSP亚单位疫苗的免疫效果评估

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吕氏泰勒虫TlSP在毕赤酵母的分泌表达及重组TlSP亚单位疫苗的免疫效果评估
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-15页
第一章 引言第15-27页
  1.1 羊泰勒虫概述第15-18页
    1.1.1 病原第15-16页
    1.1.2 生活史第16页
    1.1.3 流行病学第16-17页
    1.1.4 临床和病理特征第17页
    1.1.5 治疗和预防第17-18页
  1.2 抗泰勒虫疫苗研究进展第18-24页
    1.2.1 灭活疫苗第18页
    1.2.2 强毒活疫苗第18-19页
    1.2.3 弱毒活疫苗第19-20页
      1.2.3.1 从自然界筛选弱毒株第19页
      1.2.3.2 传代驯化致弱第19-20页
      1.2.3.3 物理或化学致弱第20页
    1.2.4 亚单位疫苗和DNA疫苗第20-24页
      1.2.4.1 子孢子表面抗原第21-22页
      1.2.4.2 裂殖体表面抗原第22-23页
      1.2.4.3 裂殖子表面抗原第23-24页
      1.2.4.4 配子体表面抗原第24页
  1.3 毕赤酵母表达系统第24-25页
  1.4 研究内容和目的第25-27页
第二章 吕氏泰勒虫TlSP基因的克隆和序列分析第27-38页
  2.1 材料第27-28页
    2.1.1 虫株、菌株及质粒第27页
    2.1.2 主要试剂第27页
    2.1.3 主要仪器耗材第27页
    2.1.4 培养基及溶液配方第27-28页
  2.2 方法第28-31页
    2.2.1 虫体总RNA的提取与cDNA第一链的合成第28页
    2.2.2 吕氏泰勒虫TlSP基因的扩增第28-29页
    2.2.3 TlSP基因与pGEM-T Easy载体的连接与转化第29页
    2.2.4 吕氏泰勒虫TlSP基因的序列比对分析第29页
    2.2.5 吕氏泰勒虫TlSP基因的生物信息学分析第29页
    2.2.6 吕氏泰勒虫TlSP基因免疫优势区域的扩增第29-30页
    2.2.7 TlSP基因免疫优势区域与pGEM-T Easy载体的连接与转化第30-31页
  2.3 结果第31-37页
    2.3.1 虫体总RNA的提取第31页
    2.3.2 TlSP基因及其免疫优势区的扩增第31页
    2.3.3 吕氏泰勒虫TlSP基因序列比对第31-34页
    2.3.4 吕氏泰勒虫TlSP的生物信息学分析第34-37页
      2.3.4.1 TlSP的跨膜区与结构分析第34-35页
      2.3.4.2 TlSP的抗原性分析第35-36页
      2.3.4.3 TlSP的糖基化位点与磷酸化位点分析第36-37页
  2.4 讨论第37-38页
第三章 吕氏泰勒虫TlSP基因在毕赤酵母中的分泌表达第38-50页
  3.1 材料第38-39页
    3.1.1 菌株及质粒第38页
    3.1.2 主要试剂第38页
    3.1.3 主要仪器第38页
    3.1.4 培养基及溶液配方第38-39页
  3.2 方法第39-43页
    3.2.1 真核表达质粒pPIC9K-TlSP的构建第39-40页
    3.2.2 重组质粒pPIC9K-TlSP的线性化第40页
    3.2.3 毕赤酵母感受态细胞的制备第40-41页
    3.2.4 重组质粒pPIC9K-TlSP的电击转化第41页
    3.2.5 遗传霉素(G418)筛选多拷贝插入转化子第41页
    3.2.6 菌落PCR分析重组质粒在毕赤酵母中的整合第41-42页
    3.2.7 重组TlSP Mut~+和Mut~s的分泌表达第42-43页
    3.2.8 重组TlSP的大量表达和制备第43页
    3.2.9 重组TlSP的反应原性分析第43页
  3.3 结果第43-48页
    3.3.1 真核表达质粒pPIC9K-TlSP的酶切鉴定第43页
    3.3.2 MD平板筛选His~+转化子第43-44页
    3.3.3 遗传霉素筛选高拷贝插入转化子第44-45页
    3.3.4 PCR分析TlSP基因在毕赤酵母基因组的整合情况第45-46页
    3.3.5 pPIC9K-TlSP在GS115/Mut~+和KM71/Mut~s中的表达及鉴定第46-47页
    3.3.6 重组蛋白TlSP的制备及反应原性分析第47-48页
  3.4 讨论第48-50页
第四章 重组TlSP亚单位疫苗的免疫效果评估第50-64页
  4.1 材料第50-51页
    4.1.1 试验羊及媒介蜱第50页
    4.1.2 主要试剂第50页
    4.1.3 主要仪器第50-51页
    4.1.4 溶液及配方第51页
  4.2 方法第51-55页
    4.2.0 试验绵羊血液基因组的提取第51页
    4.2.1 野外蜱基因组的提取第51-52页
    4.2.2 免疫前试验绵羊和野外蜱的泰勒虫检测第52-53页
    4.2.3 TlSP重组亚单位疫苗的制备第53页
      4.2.3.1 重组TlSP的透析、浓缩和定量第53页
      4.2.3.2 疫苗的制备第53页
    4.2.4 免疫程序及攻蜱试验第53-54页
    4.2.5 试验绵羊样品和数据的收集第54页
    4.2.6 试验绵羊抗体效价和细胞因子的测定第54页
      4.2.6.1 试验绵羊抗体效价的测定第54页
      4.2.6.2 试验绵羊IL-2、IL-4和IFN-γ的测定第54页
    4.2.7 T淋巴细胞增殖试验第54-55页
      4.2.7.1 PMBC的分离第54-55页
      4.2.7.2 T淋巴细胞增殖试验第55页
  4.3 结果第55-62页
    4.3.1 免疫前试验绵羊和野外蜱的泰勒虫检测第55-56页
    4.3.2 重组TlSP的定量和亚单位疫苗的制备第56-57页
    4.3.3 攻蜱后试验绵羊的临床症状第57页
    4.3.4 攻蜱后试验绵羊的体温情况第57页
    4.3.5 攻蜱后试验绵羊的染虫率第57-59页
    4.3.6 攻蜱后试验绵羊的血相变化第59页
    4.3.7 免疫后试验绵羊抗体水平的检测第59-60页
    4.3.8 亚单位疫苗刺激T细胞的增殖效果第60-61页
    4.3.9 免疫后试验绵羊细胞因子的检测第61-62页
  4.4 讨论第62-64页
第五章 全文结论第64-65页
参考文献第65-77页
附录第77-78页
致谢第78-79页
作者简介第79页

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