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弓形虫循环抗原表达及镧系微球免疫层析试纸条的研制

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弓形虫循环抗原表达及镧系微球免疫层析试纸条的研制
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-17页
第一章 引言第17-23页
  1.1 弓形虫概述第17-18页
    1.1.1 弓形虫病原学第17页
    1.1.2 弓形虫生命周期第17-18页
  1.2 弓形虫排泄分泌抗原研究进展第18-20页
  1.3 弓形虫病的诊断第20-21页
  1.4 镧系微球试纸条层析技术第21-22页
  1.5 本研究的意义第22-23页
第二章 弓形虫GRA1、mic4基因的克隆与原核表达第23-37页
  2.1 材料与仪器第23-24页
    2.1.1 虫体、菌株与载体第23页
    2.1.2 主要试剂第23-24页
    2.1.3 实验仪器第24页
  2.2 方法第24-28页
    2.2.1 引物的设计与合成第24页
    2.2.2 弓形虫速殖子的收集和RNA提取第24-25页
    2.2.3 基因的RT-PCR扩增第25-26页
    2.2.4 重组表达质粒的构建和鉴定第26-27页
    2.2.5 重组质粒诱导表达第27页
    2.2.6 重组蛋白的纯化第27-28页
    2.2.7 重组蛋白Western-blot分析第28页
  2.3 结果与分析第28-36页
    2.3.1 目的基因的扩增第28页
    2.3.2 重组表达质粒的鉴定第28-29页
    2.3.3 原核表达产物的SDS-PAGE及可溶性分析第29-31页
    2.3.4 重组质粒原核表达条件的优化第31-34页
    2.3.5 重组蛋白的纯化第34-35页
    2.3.6 重组蛋白的Western-blot分析第35-36页
  2.4 讨论第36-37页
第三章 GRA1单克隆抗体的制备及鉴定第37-49页
  3.1 材料第37-39页
    3.1.1 实验动物及细胞株第37页
    3.1.2 主要试剂与耗材第37-38页
    3.1.3 实验仪器第38页
    3.1.4 相关溶液第38-39页
  3.2 方法第39-43页
    3.2.1 重组抗原的准备第39页
    3.2.2 免疫BALB/c小鼠第39-40页
    3.2.3 单克隆抗体的制备第40-42页
    3.2.4 单抗效价的测定第42-43页
    3.2.5 间接免疫荧光实验第43页
    3.2.6 Western-blot分析第43页
  3.3 结果与分析第43-47页
    3.3.1 BALB/c小鼠的免疫第43-44页
    3.3.2 细胞融合后观察第44页
    3.3.3 筛选阳性克隆第44-45页
    3.3.4 单抗效价测定第45-46页
    3.3.5 间接免疫荧光试验分析第46页
    3.3.6 Western-blot分析结果第46-47页
  3.4 讨论第47-49页
第四章 镧系微球免疫层析试纸条检测血清抗体方法的建立第49-65页
  4.1 材料与仪器第49-51页
    4.1.1 试剂第49页
    4.1.2 实验材料第49-50页
    4.1.3 仪器第50页
    4.1.4 主要相关试剂溶液配制第50-51页
  4.2 方法第51-55页
    4.2.1 抗原的准备和鉴定第51页
    4.2.2 荧光微球标记SPA第51页
    4.2.3 免疫层析试纸条的组装第51-52页
    4.2.4 镧系微球试纸条层析、反应和结果判定第52-54页
    4.2.5 试纸条优化第54-55页
    4.2.6 荧光微球试纸条评价第55页
    4.2.7 犬血清样本的检测第55页
  4.3 结果与分析第55-63页
    4.3.1 抗原的准备和鉴定第55-57页
    4.3.2 试纸条优化第57-60页
    4.3.3 试纸条的评价第60-62页
    4.3.4 犬血清样本检测结果第62-63页
  4.4 讨论第63-65页
第五章 全文总结第65-66页
参考文献第66-74页
致谢第74-75页
作者简历第75页

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