论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 miRNAS的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.1 miRNAs的发现与形成过程 | 第13-14页 |
| 1.1.2 miRNAs靶标筛选与鉴定 | 第14页 |
| 1.2 miRNAS在骨骼肌中功能的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 miRNAs与骨骼肌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 miRNAs对骨骼肌增殖与分化的调控 | 第15-17页 |
| 1.2.3 miRNAs对骨骼肌再生的调控 | 第17-18页 |
| 1.2.4 miRNAs对骨骼肌疾病的调控 | 第18页 |
| 1.3 miR-487b的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 miR-433的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 miR-487b、miR-433保守性及组织表达谱分析 | 第21-29页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 动物组织总RNA(包括miRNA)提取 | 第22页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第22页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.2.4 牦牛miRNAs序列克隆 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 高通量测序结果验证 | 第24页 |
| 2.3.2 牦牛miR-487b和miR-433生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.3.3 牦牛miR-487b和miR-433序列克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.4 牦牛miR-487b和miR-433保守性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.5 miR-487b和miR-433在小鼠不同组织的表达情况 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 miR-487b和miR-433促进C2C12成肌细胞增殖 | 第29-39页 |
| 3.1 材料 | 第29页 |
| 3.1.1 主要材料与试剂 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第29页 |
| 3.2 方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第30-31页 |
| 3.2.3 CCK-8法检测细胞增殖 | 第31页 |
| 3.2.4 细胞总RNA提取及qRT-PCR | 第31-32页 |
| 3.2.5 蛋白免疫印迹检测相关基因 | 第32页 |
| 3.2.6 数据处理 | 第32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.3.1 转染试剂的选择 | 第32-33页 |
| 3.3.2 miR-487b和miR-433在C2C12细胞增殖过程中的表达 | 第33-34页 |
| 3.3.3 过表达miR-487b和miR-433促进C2C12细胞增殖 | 第34-36页 |
| 3.3.4 干扰miR-487b和miR-433抑制C2C12细胞增殖 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 miR-487b和miR-433抑制C2C12成肌细胞分化 | 第39-48页 |
| 4.1 材料 | 第39页 |
| 4.1.1 材料与主要试剂 | 第39页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 4.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第39-40页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第40页 |
| 4.2.3 细胞总RNA提取及qRT-PCR | 第40-41页 |
| 4.2.4 蛋白免疫印迹检测相关基因 | 第41-42页 |
| 4.2.5 数据处理 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 4.3.1 C2C12成肌细胞分化模型建立 | 第42-43页 |
| 4.3.2 miR-487b和miR-433在C2C12细胞分化过程中的表达模式 | 第43页 |
| 4.3.3 miR-487b和miR-433抑制C2C12细胞成肌分化 | 第43-45页 |
| 4.3.4 抑制miR-487b和miR-433促进C2C12细胞成肌分化 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 第五章 miR-487b可能通过靶向PITX2调控骨骼肌发育 | 第48-54页 |
| 5.1 材料 | 第48页 |
| 5.1.1 材料与主要试剂 | 第48页 |
| 5.2 方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 miR-487b靶基因预测 | 第48页 |
| 5.2.2 靶基因引物设计 | 第48页 |
| 5.2.3 qRT-PCR | 第48-49页 |
| 5.2.4 构建靶基因突变载体与野生型载体 | 第49页 |
| 5.2.5 细胞培养及转染 | 第49-50页 |
| 5.2.6 双荧光素酶检测 | 第50页 |
| 5.2.7 数据处理 | 第50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-52页 |
| 5.3.1 靶基因预测 | 第50页 |
| 5.3.2 PITX2在成肌细胞增殖和分化过程中的表达变化 | 第50-51页 |
| 5.3.3 miR-487b的表达水平与靶基因PITX2的关系 | 第51页 |
| 5.3.4 双荧光素酶报告系统验证PITX2是miR-487b的直接靶基因 | 第51-52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 5.5 小结 | 第53-54页 |
| 第六章 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
