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大片吸虫两种排泄分泌蛋白的克隆、表达及其对山羊外周血单个核细胞功能影响的研究

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大片吸虫两种排泄分泌蛋白的克隆、表达及其对山羊外周血单个核细胞功能影响的研究
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-15页
第一章 引言第15-20页
  1.1 片形吸虫病及片形吸虫概述第15页
  1.2 ESPs对于片形吸虫寄生的重要性第15-16页
  1.3 ESPs的分类第16-19页
    1.3.1 氧化应激相关蛋白第16-17页
    1.3.2 能量代谢相关蛋白第17页
    1.3.3 蛋白水解酶第17-18页
    1.3.4 Cathepsin B第18页
    1.3.5 Cathepsin L第18-19页
  1.4 展望第19-20页
第二章 大片吸虫14-3-3e基因和Rab-10基因的克隆、表达和序列分析第20-36页
  2.1 材料第20-21页
    2.1.1 虫体与动物第20页
    2.1.2 菌种和载体第20页
    2.1.3 主要试剂第20-21页
    2.1.4 主要仪器设备第21页
  2.2 实验方法第21-30页
    2.2.1 大片吸虫总RNA的提取第21页
    2.2.2 大片吸虫总RNA的反转录第21-22页
    2.2.3 引物的设计与合成第22-23页
    2.2.4 PCR扩增14-3-3e和Rab-10基因第23-24页
    2.2.5 PCR产物的纯化第24页
    2.2.6 PCR产物与T载体的连接第24页
    2.2.7 连接产物的转化第24页
    2.2.8 阳性克隆的酶切鉴定第24-25页
    2.2.9 重组质粒测序第25页
    2.2.10 表达载体的构建与鉴定第25-27页
      2.2.10.1 重组质粒pPIC9K-14-3-3e的构建第25页
      2.2.10.2 重组质粒pPIC9K-14-3-3e的线性化第25-26页
      2.2.10.3 酵母电感受态细胞的制备第26页
      2.2.10.4 转化与菌落筛选第26页
      2.2.10.5 重组质粒pET-SUMO-Rab-10的构建与鉴定第26-27页
    2.2.11 重组蛋白的诱导表达第27-29页
      2.2.11.1 重组蛋白14-3-3e的小量诱导表达第27-28页
      2.2.11.2 重组蛋白14-3-3e的大量诱导表达第28页
      2.2.11.3 重组蛋白14-3-3e的纯化第28页
      2.2.11.4 重组蛋白Rab-10的小量诱导表达第28-29页
      2.2.11.5 重组蛋白Rab-10分布的确定第29页
      2.2.11.6 重组蛋白Rab-10的纯化第29页
    2.2.12 重组蛋白多克隆血清的制备第29-30页
    2.2.13 人工感染大片吸虫的山羊血清的制备第30页
    2.2.14 重组蛋白的Western-blot验证第30页
  2.3 结果第30-35页
    2.3.1 14 -3-3e、Rab-10基因的PCR扩增第30-31页
    2.3.2 重组克隆质粒pMD19-T-14-3-3e和pMD19-T-Rab-10的鉴定第31页
    2.3.3 14 -3-3e、Rab-10基因的序列分析第31-32页
    2.3.4 重组表达质粒pPIC9K-14-3-3e和pET-SUMO-Rab-10的鉴定第32-33页
    2.3.5 重组蛋白r14-3-3e和rRab-10的表达与纯化第33-34页
    2.3.6 重组蛋白r14-3-3e和rRab-10的Western-blot分析第34-35页
  2.4 讨论第35-36页
第三章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10与山羊PBMCs的结合实验第36-41页
  3.1 材料第36-37页
    3.1.1 实验动物第36页
    3.1.2 重组蛋白第36页
    3.1.3 主要试剂第36-37页
    3.1.4 主要仪器设备第37页
  3.2 方法第37-38页
  3.3 结果第38-39页
  3.4 讨论第39-41页
第四章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs细胞因子分泌的影响第41-46页
  4.1 材料第41页
    4.1.1 实验动物第41页
    4.1.2 重组蛋白第41页
    4.1.3 主要试剂第41页
    4.1.4 主要仪器设备第41页
  4.2 方法第41-43页
    4.2.1 山羊PBMCs的分离与培养第41-42页
    4.2.2 细胞因子的检测第42-43页
    4.2.3 数据分析第43页
  4.3 结果第43-44页
    4.3.1 r14-3-3e对细胞因子分泌的影响第43页
    4.3.2 rRab-10对细胞因子分泌的影响第43-44页
  4.4 讨论第44-46页
第五章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs增殖和迁移的影响第46-51页
  5.1 材料第46页
    5.1.1 实验动物第46页
    5.1.2 重组蛋白第46页
    5.1.3 主要试剂第46页
    5.1.4 主要仪器设备第46页
  5.2 方法第46-48页
    5.2.1 细胞增殖实验第46-47页
    5.2.2 细胞迁移实验第47-48页
    5.2.3 数据分析第48页
  5.3 结果第48-49页
    5.3.1 r14-3-3e对山羊PBMCs增殖和迁移的影响第48-49页
    5.3.2 rRab-10对山羊PBMCs增殖和迁移的影响第49页
  5.4 讨论第49-51页
第六章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响第51-56页
  6.1 材料第51页
    6.1.1 实验动物第51页
    6.1.2 重组蛋白第51页
    6.1.3 主要试剂第51页
    6.1.4 主要仪器设备第51页
  6.2 方法第51-54页
    6.2.1 总一氧化氮的检测第51-52页
    6.2.2 单核细胞吞噬能力的分析第52-53页
    6.2.3 数据分析第53-54页
  6.3 结果第54-55页
    6.3.1 r14-3-3e对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响第54页
    6.3.2 rRab-10对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响第54-55页
  6.4 讨论第55-56页
第七章 全文结论第56-57页
参考文献第57-64页
附录第64-65页
致谢第65-66页
作者简历第66页

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