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灰飞虱体内与大麦黄条点花叶病毒核衣壳蛋白互作的蛋白鉴定及功能分析

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灰飞虱体内与大麦黄条点花叶病毒核衣壳蛋白互作的蛋白鉴定及功能分析
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-12页
英文缩略表第12-13页
第一章 引言第13-26页
  1.1 介体昆虫传播植物病毒机制的研究进展第13-16页
    1.1.1 非持久性和半持久性病毒的传毒机制研究第13页
    1.1.2 持久性非增殖病毒的传毒机制研究第13-15页
    1.1.3 持久增殖性病毒传毒机制研究第15-16页
  1.2 弹状病毒研究进展第16-22页
    1.2.1 弹状病毒分类第16-17页
    1.2.2 植物弹状病毒的传播第17页
    1.2.3 弹状病毒基因组结构及蛋白功能第17-19页
    1.2.4 弹状病毒的传毒机制第19-20页
    1.2.5 大麦黄条点花叶病毒的研究进展第20-22页
  1.3 蛋白互作技术的研究与应用第22-24页
    1.3.1 分离泛素酵母双杂交膜系统第22-23页
    1.3.2 GST pull-down技术第23-24页
  1.4 目的意义和技术路线第24-26页
    1.4.1 本研究的目的和意义第24-25页
    1.4.2 本研究的技术路线第25-26页
第二章 分离泛素酵母双杂交膜系统筛选与BYSMVN互作的灰飞虱蛋白第26-45页
  2.1 材料与方法第26-36页
    2.1.1 介体昆虫的饲养与毒源的保存第26页
    2.1.2 BYSMV特异蛋白的基因克隆及载体构建第26-29页
    2.1.3 诱饵融合蛋白表达检测第29-32页
    2.1.4 诱饵载体功能验证第32页
    2.1.5 诱饵pDHB1-N筛选灰飞虱cDNA文库第32-35页
    2.1.6 二次互作验证第35-36页
  2.2 结果与分析第36-43页
    2.2.1 诱饵载体pDHB1-N的构建第36-37页
    2.2.2 诱饵融合蛋白表达检测第37-38页
    2.2.3 诱饵载体功能验证第38页
    2.2.4 文库筛选条件的优化第38-39页
    2.2.5 诱饵载体筛选灰飞虱文库第39-43页
    2.2.6 二次互作验证第43页
  2.3 讨论第43-45页
第三章 Pull-down验证BYSMVN与灰飞虱CPR1蛋白的互作第45-53页
  3.1 材料与方法第45-47页
    3.1.1 重组表达载体的构建第45页
    3.1.2 融合蛋白的小量表达检测第45-46页
    3.1.3 融合蛋白CPR1-MBP的纯化及酶切第46-47页
    3.1.4 Pull-Down验证互作第47页
  3.2 结果与分析第47-51页
    3.2.1 重组表达载体的构建第47-49页
    3.2.2 融合蛋白BYSMVN-GST的表达检测第49页
    3.2.3 融合蛋白CPR1-MBP的表达及纯化第49-50页
    3.2.4 Pull-Down互作验证第50-51页
  3.3 讨论第51-53页
第四章 利用RNAi干扰技术确定CPR1对灰飞虱传播BYSMV病毒的影响第53-61页
  4.1 材料与方法第53-56页
    4.1.1 灰飞虱体内BYSMV病毒qPCR检测技术的建立第53-55页
    4.1.2 dsRNA的制备第55页
    4.1.3 RNAi沉默CPR1后基因表达水平测定第55-56页
    4.1.4 RNAi沉默CPR1表达后传毒效率测定第56页
  4.2 结果与分析第56-60页
    4.2.1 病毒qPCR引物的溶解曲线与标准曲线第56-57页
    4.2.2 CPR1和GFP双链RNA的合成第57-58页
    4.2.3 RNAi沉默CPR1表达后CPR1和BYSMVN的表达水平第58-59页
    4.2.4 沉默CPR1后灰飞虱对BYSMV的传毒效率第59-60页
  4.3 讨论第60-61页
第五章 全文总结与研究展望第61-63页
  5.1 全文总结第61-62页
  5.2 研究展望第62-63页
参考文献第63-70页
致谢第70-71页
作者简历第71页

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