论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的特征 | 第14页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 Cry蛋白简介 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Cry蛋白的杀虫活性与分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Cry蛋白的结构特点 | 第16-18页 |
| 1.3 Cry蛋白的作用机制模型 | 第18-19页 |
| 1.3.1 成孔模型 | 第18-19页 |
| 1.3.2 信号传导模型 | 第19页 |
| 1.4 Cry蛋白的杀虫活性改造研究 | 第19-23页 |
| 1.4.1 Cry蛋白的截短 | 第20页 |
| 1.4.2 Cry蛋白上蛋白酶切割位点的改造 | 第20-21页 |
| 1.4.3 Cry蛋白与昆虫互作位点的改造 | 第21-23页 |
| 1.5 Cry1Ai和Cry1Ah蛋白 | 第23-24页 |
| 1.6 目的意义和研究内容 | 第24-25页 |
| 1.6.1 目的意义 | 第24页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 Cry1Ai蛋白对棉铃虫活性的改造 | 第25-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-38页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25-31页 |
| 2.1.2 蛋白点突变和截短引物 | 第31-36页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第36页 |
| 2.1.4 培养基与抗生素 | 第36页 |
| 2.1.5 常用缓冲液 | 第36-37页 |
| 2.1.6 供试试虫 | 第37页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 序列和结构的分析 | 第38页 |
| 2.2.2 定点突变 | 第38页 |
| 2.2.3 定点突变PCR产物和重组质粒的转化 | 第38-39页 |
| 2.2.4 反向PCR | 第39页 |
| 2.2.5 反向PCR产物的磷酸化、连接和转化 | 第39页 |
| 2.2.6 阳性转化子的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.7 目的蛋白的表达 | 第40页 |
| 2.2.8 棉铃虫生物活性的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.9 棉铃虫BBMV的提取 | 第41页 |
| 2.2.10 截短蛋白的镍亲和层析纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.11 截短蛋白的活化和生物素标记 | 第42页 |
| 2.2.12 Cry1Ai-h-loop2及其突变体截短片段与棉铃虫BBMV的结合分析 | 第42-43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-52页 |
| 2.3.1 Cry1Ai-h-loop2蛋白loop2上丙氨酸突变体的构建 | 第43页 |
| 2.3.2 丙氨酸突变体的表达和生物活性测定 | 第43-46页 |
| 2.3.3 18 种蛋白质氨基酸突变体的表达和生物活性测定 | 第46-48页 |
| 2.3.4 Cry1Ai-h-loop2和G373A/N375A双点突变体蛋白截短片段的构建 | 第48页 |
| 2.3.5 截短蛋白的表达和纯化 | 第48-49页 |
| 2.3.6 截短蛋白的消化和生物素标记 | 第49-50页 |
| 2.3.7 棉铃虫BBMV的提取 | 第50-51页 |
| 2.3.8 Cry1Ai-h-loop2和G373A/N375A与棉铃虫BBMV的结合和竞争结合分析 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 Cry1Ai蛋白loop2和loop3的功能验证及其突变体的活性分析 | 第54-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-57页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第54-56页 |
| 3.1.2 蛋白loop突变体和蛋白截短引物 | 第56页 |
| 3.1.3 生化试剂 | 第56页 |
| 3.1.4 培养基与抗生素 | 第56页 |
| 3.1.5 常用缓冲液 | 第56页 |
| 3.1.6 供试昆虫 | 第56页 |
| 3.1.7 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.2.1 反向PCR | 第57页 |
| 3.2.2 反向PCR产物的磷酸化、连接和转化 | 第57页 |
| 3.2.3 阳性转化子的鉴定 | 第57页 |
| 3.2.4 Cry1Ai、Cry1Ah和loop突变体蛋白及其截短片段的表达 | 第57-58页 |
| 3.2.5 家蚕和小菜蛾生物活性测定 | 第58-59页 |
| 3.2.6 家蚕BBMV的提取 | 第59页 |
| 3.2.7 Cry1Ai及loop突变体蛋白截短片段的纯化 | 第59页 |
| 3.2.8 Cry1Ai及loop突变体蛋白截短片段的Western Blot杂交分析 | 第59页 |
| 3.2.9 Cry1Ai及loop突变体蛋白截短片段与家蚕BBMV的ELISA分析 | 第59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-68页 |
| 3.3.1 Cry1Ai、Cry1Ah蛋白loop2和loop3突变体的构建和表达 | 第59-61页 |
| 3.3.2 Cry1Ai、Cry1Ah及其loop突变体蛋白的提取 | 第61-62页 |
| 3.3.3 Cry1Ai、Cry1Ah及其loop突变体蛋白对家蚕的生物活性测定 | 第62-65页 |
| 3.3.4 突变体Cry1Ai-h-loop2&3蛋白对小菜蛾的生物活性测定 | 第65页 |
| 3.3.5 截短片段T-Cry1Ai-h-loop2&3蛋白的构建和表达 | 第65-66页 |
| 3.3.6 T-Cry1Ai和T-Cry1Ai-h-loop2&3蛋白的纯化和Western blot杂交分析 | 第66-67页 |
| 3.3.7 家蚕BBMV的提取 | 第67-68页 |
| 3.3.8 T-Cry1Ai和T-Cry1Ai-h-loop2&3蛋白与家蚕BBMV的结合分析 | 第68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
