论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 杂色鲍的养殖现状及幼虫研究 | 第11页 |
| 1.2 无脊椎动物幼虫附着变态的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.1 鲍幼虫发育研究 | 第11-12页 |
| 1.2.2 海洋无脊椎动物幼虫附着变态的研究进展 | 第12页 |
| 1.3 IGFs系统及胰岛素样蛋白概述 | 第12-18页 |
| 1.3.1 IGF信号通路研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.2 IGFBP4的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.3 IGFBP5的研究进展 | 第15页 |
| 1.3.4 IGFBP7的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.5 无脊椎动物胰岛素样生长因子研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.5 主要研究内容和技术路线 | 第19-20页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第19页 |
| 1.5.2 主要技术路线 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 引物 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 (TRIzol法) 和去除DNA的污染 | 第22页 |
| 2.2.2 合成RT-PCR cDNA第一链和PCR扩增获取基因cDNA片段 | 第22-23页 |
| 2.2.3 SMART-RACE技术获取基因全长 | 第23-24页 |
| 2.2.4 割胶纯化基因片段 | 第24-25页 |
| 2.2.5 与质粒载体连接 | 第25页 |
| 2.2.6 感受态细胞的转化及筛选 | 第25页 |
| 2.2.7 质粒插入片段的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.8 质粒测序 | 第26页 |
| 2.2.9 目的基因的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR (Real-time PCR) 反应体系及条件 | 第26-27页 |
| 2.2.11 RNAi实验 | 第27-30页 |
| 2.2.12 原核表达 | 第30-33页 |
| 第3章 结果 | 第33-71页 |
| 3.1 杂色鲍各组织总RNA的抽提结果 | 第33页 |
| 3.2 RACE-PCR扩增结果 | 第33-35页 |
| 3.3 hdIGFBP4、5、7、hdMIRP生物信息学分析 | 第35-57页 |
| 3.3.1 hdIGFBP4 生物信息学分析 | 第35-40页 |
| 3.3.2 hdIGFBP5 生物信息学分析 | 第40-45页 |
| 3.3.3 hdIGFBP7 生物信息学分析 | 第45-51页 |
| 3.3.4 hdMIRP 生物信息学分析 | 第51-57页 |
| 3.4 杂色鲍 hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP 基因的表达特征 | 第57-65页 |
| 3.4.1 RNAi技术干扰hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因幼虫的附着率与死亡率 | 第57-58页 |
| 3.4.2 RNAi后hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因的表达情况 | 第58-62页 |
| 3.4.3 干扰后，胰岛素/胰岛素样蛋白/胰岛素样生长因子结合蛋白相关通路的表达情况 | 第62-65页 |
| 3.5 原核表达 | 第65-71页 |
| 3.5.1 重组表达载体pET-22b-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的构建及表达 | 第65-67页 |
| 3.5.2 重组表达载体pET-32a-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的构建及表达 | 第67-69页 |
| 3.5.3 密码子预测分析 | 第69-71页 |
| 第4章 讨论 | 第71-76页 |
| 4.1 胰岛素样生长因子结合蛋白 4 | 第71-72页 |
| 4.2 胰岛素样生长因子结合蛋白 5 | 第72-73页 |
| 4.3 胰岛素样生长因子结合蛋白 7 | 第73-74页 |
| 4.4 胰岛素样蛋白 | 第74-76页 |
| 第5章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 在校期间发表的文章 | 第84页 |
