论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-26页 |
| 1.1 海洋无脊椎动物幼虫的变态反应与定量PCR芯片技术 | 第13-14页 |
| 1.2 海洋无脊椎动物TH信号通路的研究进展 | 第14-23页 |
| 1.2.1 甲状腺激素的合成 | 第15-16页 |
| 1.2.2 甲状腺激素的分解 | 第16-18页 |
| 1.2.3 甲状腺激素对下游基因的调控机制 | 第18-23页 |
| 1.3 内参筛选 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第24页 |
| 1.5 主要研究内容和技术路线 | 第24-26页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.2 主要技术路线 | 第25-26页 |
| 第2章 杂色鲍幼虫变态差异表达基因的筛选 | 第26-37页 |
| 2.1 材料 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-28页 |
| 2.3.1 杂色鲍幼虫变态过程差异表达基因的筛选结果 | 第26页 |
| 2.3.2 GO注释结果 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-37页 |
| 第3章 杂色鲍幼虫变态过程内参基因的筛选 | 第37-49页 |
| 3.1 材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验样品的采集 | 第37页 |
| 3.1.2 实验主要仪器和试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 候选内参基因的选择及引物设计 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 杂色鲍幼虫变态过程总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.2 合成RT-PCR c DNA第一链和RT-PCR扩增获取基因片段 | 第38页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR反应体系及条件 | 第38-39页 |
| 3.2.4 基因引物特异性鉴定 | 第39页 |
| 3.2.5 引物扩增效率和标准曲线的检验 | 第39页 |
| 3.2.6 内参基因表达稳定性分析 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-46页 |
| 3.3.1 杂色鲍幼虫总RNA的提取结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 杂色鲍幼虫变态过程内参基因筛选结果 | 第40-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第4章 定量PCR芯片研究杂色鲍变态差异表达基因 | 第49-61页 |
| 4.1 材料 | 第49页 |
| 4.1.1 实验样品的采集 | 第49页 |
| 4.1.2 实验主要仪器和试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 4.2.1 杂色鲍幼虫变态过程总RNA的提取 | 第49页 |
| 4.2.2 合成RT-PCR c DNA第一链和RT-PCR扩增获取基因片段 | 第49页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR反应体系及条件 | 第49页 |
| 4.2.4 基因引物特异性鉴定 | 第49页 |
| 4.2.5 杂色鲍幼虫变态差异表达基因的表达分析 | 第49-50页 |
| 4.2.6 杂色鲍幼虫变态差异表达基因的作用网络分析 | 第50页 |
| 4.3 结果 | 第50-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-61页 |
| 第5章 TH信号通路在杂色鲍变态中的作用分析 | 第61-85页 |
| 5.1 材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 实验样品的采集 | 第61页 |
| 5.1.2 实验主要仪器和试剂 | 第61页 |
| 5.1.3 引物 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-67页 |
| 5.2.1 杂色鲍幼虫变态过程总RNA的提取 | 第62页 |
| 5.2.2 合成RT-PCR c DNA第一链和RT-PCR扩增获取基因片段 | 第62页 |
| 5.2.3 SMART-RACE技术获取基因全长 | 第62-64页 |
| 5.2.4 割胶纯化基因片段 | 第64页 |
| 5.2.5 与PET19-T质粒载体连接 | 第64页 |
| 5.2.6 JM109感受态细胞的转化及筛选 | 第64页 |
| 5.2.7 质粒插入片段的PCR检测 | 第64-65页 |
| 5.2.8 质粒测序 | 第65页 |
| 5.2.9 目的基因的生物信息学分析 | 第65页 |
| 5.2.10 实时荧光定量PCR反应体系及条件 | 第65页 |
| 5.2.11 T_3诱导实验 | 第65-66页 |
| 5.2.12 RNA干扰实验 | 第66-67页 |
| 5.3 实验结果 | 第67-82页 |
| 5.3.1 TH信号通路关键基因在杂色鲍变态三时期的表达情况 | 第67-69页 |
| 5.3.2 T_3诱导实验结果 | 第69页 |
| 5.3.3 RACE-PCR扩增结果 | 第69-70页 |
| 5.3.4 TRβ 基因序列分析 | 第70-77页 |
| 5.3.5 TRβ RNAi实验结果 | 第77-82页 |
| 5.4 讨论 | 第82-85页 |
| 第6章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第95页 |
