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产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌株的构建

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产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌株的构建
论文目录
 
摘要第1-7页
abstract第7-12页
第1章 绪论第12-26页
  1.1 异丁醇简介第12-13页
    1.1.1 异丁醇的结构与性质第12页
    1.1.2 异丁醇的用途第12-13页
    1.1.3 异丁醇的工业生产方法第13页
  1.2 微生物合成异丁醇的研究进展第13-20页
    1.2.1 合成生物学的定义第13-14页
    1.2.2 合成生物学的应用第14页
    1.2.3 合成异丁醇菌株第14-16页
    1.2.4 异丁醇生物合成途径第16-17页
    1.2.5 异丁醇生物合成相关酶及其调控机制第17-19页
    1.2.6 宿主菌应对异丁醇的压力响应及其调控机制第19-20页
  1.3 提高异丁醇生物合成的策略第20-25页
    1.3.1 阻断或弱化副产物的合成途径第20-22页
    1.3.2 强化异丁醇的合成途径第22-23页
    1.3.3 提高胞内还原力水平第23-24页
    1.3.4 其他策略第24-25页
  1.4 本研究的目的和意义第25-26页
第2章 材料与方法第26-43页
  2.1 实验材料第26-33页
    2.1.1 菌株和质粒第26-28页
    2.1.2 PCR引物第28-31页
    2.1.3 培养基、培养温度及抗生素使用浓度第31页
    2.1.4 工具酶及试剂第31-32页
    2.1.5 抽提液和缓冲液第32-33页
    2.1.6 主要实验仪器第33页
  2.2 实验方法第33-43页
    2.2.1 分子实验方法第33-37页
    2.2.2 菌株对异丁醇的耐受性分析第37页
    2.2.3 重组载体的构建第37-39页
    2.2.4 重组质粒转化DH5α 大肠杆菌第39页
    2.2.5 重组质粒转化地衣芽胞杆菌第39-40页
    2.2.6 地衣芽胞杆菌的基因敲除第40-41页
    2.2.7 在地衣芽胞杆菌中筛选醇脱氢酶表达催化异丁醛转化成异丁醇第41页
    2.2.8 地衣芽胞杆菌异丁醇发酵培养第41页
    2.2.9 分析方法第41-43页
第3章 结果与分析第43-72页
  3.1 异丁醇耐受性的分析第43-46页
  3.2 催化异丁醛转化成异丁醇的醇脱氢酶的筛选第46-53页
    3.2.1 醇脱氢酶表达载体的构建第46-50页
    3.2.2 醇脱氢酶在地衣芽胞杆菌中的表达第50-53页
  3.3 产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌的构建第53-60页
    3.3.1 醇脱氢酶整合型表达质粒的构建第53-54页
    3.3.2 地衣芽胞杆菌染色体上整合表达醇脱氢酶第54-56页
    3.3.3 酮酸脱羧酶表达质粒的构建第56-57页
    3.3.4 产异丁醇地衣芽胞杆菌工程菌的构建第57-60页
  3.4 基因bkdB缺失对地衣芽胞杆菌产异丁醇的影响第60-64页
    3.4.1 敲除质粒T2(2)-oriΔbkdB的构建第60-62页
    3.4.2 构建bkdB基因缺失菌株第62-63页
    3.4.3 bkdB缺失对DW2-02 工程菌异丁醇合成的影响第63-64页
  3.5 旁路途经基因缺失对异丁醇合成的影响第64-72页
    3.5.1 敲除质粒T2(2)-oriΔldh的构建第64-65页
    3.5.2 构建bkdB和ldh基因双缺失菌株第65-67页
    3.5.3 构建bkdB和leuA基因双缺失菌株第67-68页
    3.5.4 构建bkdB和alsD基因双缺失菌株第68-69页
    3.5.5 基因ldh、alsD和leuA的缺失对DW2-02ΔbkdB发酵产异丁醇的影响第69-72页
第4章 结论与展望第72-74页
  4.1 结论第72页
  4.2 展望第72-74页
参考文献第74-80页
攻读硕士学位期间发表的论文及申请专利第80-81页
致谢第81页

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