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猪痘病毒TK基因的缺失和表达RHDV VP60蛋白重组猪痘病毒的构建

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猪痘病毒TK基因的缺失和表达RHDV VP60蛋白重组猪痘病毒的构建
论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-12页
英文缩写词表第12-13页
第一章 文献综述第13-22页
  1.1 猪痘病毒及其作为载体的研究进展第13-16页
    1.1.1 猪痘病毒概述第13页
    1.1.2 猪痘病毒的分子生物学特性第13-15页
    1.1.3 猪痘病毒作为载体的研究进展第15-16页
  1.2 兔病毒性出血症病毒及其疫苗的研究进展第16-22页
    1.2.1 兔病毒性出血症病毒概述第16-17页
    1.2.2 兔病毒性出血症分子生物学特性第17-19页
    1.2.3 兔病毒性出血症病毒疫苗研究进展第19-22页
第二章 兔病毒性出血症病毒VP60基因的克隆表达第22-36页
  2.1 材料第22-25页
    2.1.1 质粒、菌株和毒株第22页
    2.1.2 主要生化试剂第22页
    2.1.3 试剂、培养基的配制第22-24页
    2.1.4 仪器设备第24-25页
    2.1.5 引物设计第25页
  2.2 方法第25-29页
    2.2.1 RHDV核酸的提取第25页
    2.2.2 VP60基因的RT-PCR扩增第25-26页
    2.2.3 PCR产物纯化第26页
    2.2.4 VP60基因的克隆第26-28页
    2.2.5 重组表达载体pET-32a(+)-VP60的构建第28页
    2.2.6 表达载体pET-32a(+)-VP60的诱导表达第28-29页
    2.2.7 包涵体的纯化第29页
    2.2.8 重组蛋白His-VP60的反应原性检测第29页
  2.3 结果第29-34页
    2.3.1 VP60基因的PCR扩增结果第29页
    2.3.2 重组质粒pGEM-T-VP60的酶切鉴定第29-30页
    2.3.3 VP60基因测序第30-32页
    2.3.4 VP60基因序列分析第32-33页
    2.3.5 重组质粒pET-32a(+)-VP60双酶切鉴定第33页
    2.3.6 诱导表达和融合蛋白的纯化第33-34页
    2.3.7 重组蛋白反应原性检测结果第34页
  2.4 讨论第34-35页
    2.4.1 RHDV VP60基因的序列测定与分析第34-35页
    2.4.2 VP60基因的原核表达第35页
  2.5 小结第35-36页
第三章 以绿色荧光蛋白为筛选标记构建TK基因缺失猪痘病毒第36-49页
  3.1 材料第36-38页
    3.1.1 质粒和菌株第36页
    3.1.2 细胞和病毒第36页
    3.1.3 主要生化试剂第36页
    3.1.4 试剂、培养基的配制第36-37页
    3.1.5 仪器设备第37页
    3.1.6 P11启动子序列第37-38页
    3.1.7 引物设计第38页
  3.2 方法第38-43页
    3.2.1 猪痘病毒的培养第38-39页
    3.2.2 病毒DNA的提取第39页
    3.2.3 TK1、TK2和P11-egfp基因的PCR扩增第39页
    3.2.4 转移载体的构建第39-41页
    3.2.5 转染质粒的提取及浓度测定第41页
    3.2.6 转染第41-42页
    3.2.7 重组病毒的纯化第42页
    3.2.8 重组病毒的PCR鉴定第42-43页
    3.2.9 重组病毒的遗传稳定性测定第43页
  3.3 结果第43-47页
    3.3.1 重组臂和egfp基因的PCR扩增结果第43页
    3.3.2 转移载体pSWE11的酶切鉴定第43-45页
    3.3.3 转染结果第45页
    3.3.4 重组病毒的纯化与PCR鉴定第45-47页
    3.3.5 重组病毒的遗传稳定性分析第47页
  3.4 讨论第47-48页
    3.4.1 猪痘病毒TK基因作为外源基因插入位点第47页
    3.4.2 绿色荧光蛋白作为筛选标记第47页
    3.4.3 P11启动子第47-48页
  3.5 小结第48-49页
第四章 以LacZ基因为筛选标记构建TK基因缺失猪痘病毒第49-58页
  4.1 材料第49-50页
    4.1.1 质粒和菌株第49页
    4.1.2 细胞和病毒第49页
    4.1.3 主要生化试剂第49页
    4.1.4 试剂、培养基的配制第49页
    4.1.5 仪器设备第49-50页
    4.1.6 P28启动子序列第50页
    4.1.7 引物设计第50页
  4.2 方法第50-52页
    4.2.1 P11-LacZ和P28-LacZ基因的PCR扩增第50页
    4.2.2 转移载体的构建第50-51页
    4.2.3 转染质粒的提取及浓度测定第51页
    4.2.4 转染第51页
    4.2.5 重组病毒的纯化第51-52页
    4.2.6 重组病毒的PCR鉴定第52页
    4.2.7 重组病毒的遗传稳定性测定第52页
  4.3 结果第52-56页
    4.3.1 P11-LacZ和P28-LacZ基因的PCR扩增结果第52-53页
    4.3.2 转移载体pSWZ11和pSWZ28的酶切鉴定第53-54页
    4.3.3 重组病毒的纯化第54-55页
    4.3.4 重组病毒rSWPV-Z11和rSWPV-Z28的PCR鉴定第55-56页
    4.3.5 重组病毒的遗传稳定性分析第56页
  4.4 讨论第56-57页
    4.4.1 LacZ基因作为筛选标记第56页
    4.4.2 P11启动子与P28启动子第56-57页
  4.5 小结第57-58页
第五章 表达RHDV VP60蛋白重组猪痘病毒的构建第58-69页
  5.1 材料第58-59页
    5.1.1 质粒和菌株第58页
    5.1.2 细胞和病毒第58页
    5.1.3 主要生化试剂第58页
    5.1.4 试剂、培养基的配制第58-59页
    5.1.5 仪器设备第59页
    5.1.6 P7.5启动子序列第59页
    5.1.7 引物设计第59页
  5.2 方法第59-62页
    5.2.1 P7.5启动子、P7.5-VP60和P28-VP60基因的PCR扩增第59-60页
    5.2.2 转移载体的构建第60-61页
    5.2.3 转染质粒的提取及浓度测定第61页
    5.2.4 转染第61页
    5.2.5 重组病毒的纯化第61页
    5.2.6 重组病毒的PCR鉴定第61页
    5.2.7 重组病毒的Western blotting分析第61-62页
    5.2.8 重组病毒的遗传稳定性测定第62页
    5.2.9 重组病毒的超薄切片观察第62页
  5.3 结果第62-67页
    5.3.1 P7.5启动子、P7.5-VP60和P28-VP60基因的扩增结果第62-63页
    5.3.2 重组载体pSWE11-7.5V和pSWE11-28V的酶切验证第63-65页
    5.3.3 重组病毒rSWPV-E11-7.5V和rSWPV-E11-28V的PCR鉴定第65-66页
    5.3.4 重组病毒的遗传稳定性分析第66页
    5.3.5 重组病毒的Western blotting分析第66页
    5.3.6 重组病毒的超薄切片观察第66-67页
  5.4 讨论第67-68页
  5.5 小结第68-69页
全文总结第69-70页
参考文献第70-76页
致谢第76页

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