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猪痘病毒的分离鉴定及表达PCV2衣壳蛋白重组猪痘病毒的构建

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猪痘病毒的分离鉴定及表达PCV2衣壳蛋白重组猪痘病毒的构建
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-11页
英文缩写词表第11-12页
第一章 文献综述第12-19页
  1.1 猪痘病毒研究进展第12-16页
    1.1.1 猪痘病毒的形态学及理化特性第12页
    1.1.2 猪痘病毒的理化特性第12页
    1.1.3 猪痘的发病概况第12-14页
    1.1.4 猪痘病毒分子生物学特性第14-15页
    1.1.5 猪痘病毒作为载体的研究进展第15-16页
  1.2 猪圆环病毒2型研究进展第16-17页
    1.2.1 猪圆环病毒2型病原学第16-17页
    1.2.2 猪圆环病毒2型基因结构与功能第17页
  1.3 猪圆环病毒2型疫苗研究进展第17-19页
    1.3.1 灭活苗第17页
    1.3.2 弱毒疫苗第17-18页
    1.3.3 基因工程苗第18-19页
第二章 猪痘病毒JX-20G株的分离与鉴定第19-30页
  2.1 实验材料第19-20页
    2.1.1 病料及细胞株第19页
    2.1.2 实验试剂及配制第19页
    2.1.3 实验器材第19-20页
    2.1.4 引物设计第20页
  2.2 实验方法第20-22页
    2.2.1 猪痘病毒的分离第20页
    2.2.2 猪痘病毒分离毒株的鉴定第20-22页
  2.3 结果第22-28页
    2.3.1 猪痘病毒的分离第22-23页
    2.3.2 猪痘病毒的鉴定第23页
    2.3.3 猪痘病毒基因序列及推导的氨基酸序列同源性分析第23-24页
    2.3.4 猪痘病毒基因与其它痘病毒属基因的同源基因进化关系第24-27页
    2.3.5 病毒粒子的电镜观察第27-28页
  2.4 讨论第28-29页
    2.4.1 猪痘病毒的PK15细胞培养特性第29页
    2.4.2 猪痘病毒JX-20G株序列分析第29页
    2.4.3 猪痘病毒JX-20G株病毒粒子的电镜观察第29页
  2.5 小结第29-30页
第三章 猪圆环病毒2型全基因组克隆及序列分析第30-38页
  3.1 实验材料第30-31页
    3.1.1 质粒、菌株和毒株第30页
    3.1.2 主要试剂第30页
    3.1.3 试剂配制第30-31页
    3.1.4 主要仪器设备第31页
    3.1.5 引物设计第31页
  3.2 实验方法第31-33页
    3.2.1 病毒DNA的提取第31页
    3.2.2 PCR扩增第31-32页
    3.2.3 PCR产物纯化第32页
    3.2.4 连接第32页
    3.2.5 转化第32页
    3.2.6 PCR鉴定第32-33页
    3.2.7 分离毒株的同源性及进化分析第33页
  3.3 结果第33-37页
    3.3.1 PCV2型全基因组的PCR结果第33页
    3.3.2 PCV2全基因及部分主要基因序列同源性分析第33-35页
    3.3.3 PCV2 ORF2基因推导的氨基酸序列分析第35-36页
    3.3.4 PCV2及PCV2 ORF2基因遗传进化树分析第36-37页
  3.4 讨论第37-38页
第四章 表达PCV2衣壳蛋白重组猪痘病毒的构建第38-56页
  4.1 实验材料第38-40页
    4.1.1 细胞和病毒第38页
    4.1.2 主要试剂及配制第38-39页
    4.1.3 主要仪器设备第39页
    4.1.4 P11、P7.5和P28启动子序列第39-40页
    4.1.5 引物设计第40页
  4.2 pSWE 1-28C、pSWE11-7.5C载体构建实验方法第40-44页
    4.2.1 SWPV的培养第40-41页
    4.2.2 病毒DNA的提取第41页
    4.2.3 TK1、TK2和P11-egfp基因的PCR扩增第41页
    4.2.4 P7.5启动子、P7.5-Cap和P28-Cap片段的PCR扩增第41页
    4.2.5 转移载体的构建第41-42页
    4.2.6 pSWE11-28C载体的构建第42-43页
    4.2.7 pSWE11-7.5C载体的构建第43-44页
  4.3 pSW-E11-28C、pSW-E11-7.5C重组质粒转染及重组病毒纯化第44-46页
    4.3.1 转染质粒的提取及浓度测定第44页
    4.3.2 转染过程第44页
    4.3.3 重组病毒的纯化第44-45页
    4.3.4 重组病毒的PCR鉴定第45页
    4.3.5 重组病毒的Western blotting分析第45页
    4.3.6 重组病毒超薄切片观察第45-46页
    4.3.7 重组病毒的遗传稳定性实验第46页
  4.4 实验结果第46-54页
    4.4.1 重组臂和egfp基因的扩增结果第46页
    4.4.2 P7.5-Cap、P28-Cap和P7.5启动子基因的PCR结果第46-47页
    4.4.3 转移载体pSWE11的酶切鉴定第47-48页
    4.4.4 重组载体pSWE11-28C和pSWE11-7.5C的酶切验证第48-50页
    4.4.5 转染第50页
    4.4.6 重组病毒的纯化第50-51页
    4.4.7 重组病毒的PCR鉴定第51-52页
    4.4.8 重组病毒的Western blotting分析第52-53页
    4.4.9 重组病毒超薄切片观察第53-54页
    4.4.10 重组病毒的遗传稳定性实验第54页
  4.5 讨论第54-55页
    4.5.1 猪痘病毒TK基因作为外源片段插入位点第54页
    4.5.2 筛选基因的选择第54页
    4.5.3 表达Cap蛋白重组猪痘病毒作为活载体疫苗第54-55页
  4.6 小结第55-56页
全文总结第56-57页
参考文献第57-62页
附件第62-66页
致谢第66页

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