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人TIRAP结构域TIR的克隆、表达、纯化及三维结构模型构建
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人TIRAP结构域TIR的克隆、表达、纯化及三维结构模型构建
论文目录
 
英文缩略词表第1-8 页
中方摘要第8-9 页
英文摘要第9-10 页
前言第10 页
1 研究综述第10-20 页
　　· 天然免疫系统概述第10-11 页
　　· Toll样受体第11-15 页
　　　　· Toll的发现第11-12 页
　　　　· Toll/IL-1R家族的来源第12 页
　　　　· Toll样受体的家族成员、结构特点及其特异配体第12-15 页
　　　　· TLRs之间及TLRs和辅助蛋白之间的互作第15 页
　　· TLRs介导的信号途径第15-18 页
　　　　· 依赖Myd88型信号通路第16-17 页
　　　　· 不依赖Myd88型/依赖TRIF信号通路第17-18 页
　　· TIR结构域在TLRs介导信号途径中的重要作用第18 页
　　· TIRAP第18-19 页
　　· 本课题的意义和目的第19-20 页
2 材料与方法第20-31 页
　　· 材料第20-22 页
　　　　· 试剂第20-21 页
　　　　· TIRAP基因、菌种及质粒第21-22 页
　　　　· 仪器第22 页
　　· 实验方案设计与优化第22-23 页
　　　　· TIRAPd的PCR扩增与pET15b—TIRAPd重组质粒的鉴定第22 页
　　　　· TIRAPd的诱导表达和纯化第22-23 页
　　　　· TIRAP结构域TIR的三维模建第23 页
　　· 方法第23-31 页
　　　　· 大肠杆菌感受态细胞的制备第23-24 页
　　　　· TIRAPd序列的确定第24 页
　　　　· 引物设计和PCR扩增第24 页
　　　　· 琼脂糖凝胶电泳分析第24-25 页
　　　　· 核酸回收第25 页
　　　　· 酶切回收产物和表达载体pET15b第25 页
　　　　· 连接第25-26 页
　　　　· 转化和筛选第26 页
　　　　· 碱裂解—中和法提取质粒第26-27 页
　　　　· 重组质粒的酶切分析第27 页
　　　　· 序第27 页
　　　　· 重组质粒的诱导表达第27-28 页
　　　　· SDS—PAGE电泳第28-29 页
　　　　· 菌体超声破碎第29 页
　　　　· 蛋白的镍亲和柱纯化第29-30 页
　　　　· 蛋白的分子筛纯化第30 页
　　　　· TIRAP中TIR结构域的三维模建第30-31 页
3 结果与分析第31-38 页
　　· TIRAPd的基因序列和TIR结构域蛋白序列预测第31-32 页
　　· TIRAPd的PCR扩增第32-33 页
　　· pET15b—TIRAPd重组质粒的酶切鉴定第33 页
　　· pET15b—TIRAPd重组质粒的测序第33-34 页
　　· TIRAPd的诱导表达和温度对表达的影响第34 页
　　· TIRAPd的镍亲和柱纯化第34-36 页
　　· TIRAPd分子筛纯化第36-37 页
　　· TIRAP蛋白TIR结构域的三维模型及其分析第37-38 页
4 讨论第38-40 页
　　· 表达菌株的选择第38-39 页
　　· 表达载体的选择第39 页
　　· 蛋白质的稳定性第39 页
　　· TIRAP中TIR结构域的三维模型的构建第39 页
　　· TIRAP与其它蛋白相互作用的初步研究第39-40 页
5 小结与展望第40-41 页
参考文献第41-46 页
附录一 常用生化试剂的配制第46-47 页
附录二 SDS-PAGE所需的缓冲液第47-49 页
附录三 蛋白的镍亲和柱纯化所需的缓冲液及再生方法第49-51 页
附录四 分子筛纯化所需的缓冲液第51-52 页
致谢第52页

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