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转基因棉花中外源基因cry1Ac在大肠杆菌和拟南芥中表达

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转基因棉花中外源基因cry1Ac在大肠杆菌和拟南芥中表达
论文目录
 
摘要第1-9页
ABSTRACTS第9-11页
第一章 文献综述第11-23页
  · 转基因植物及其研究现状第11-12页
    · 转基因植物第11页
    · 转基因植物应用现状第11-12页
  · 转基因作物生物安全性评价第12-14页
    · 转基因作物基因逃逸第12-13页
    · 转基因作物对非靶标生物的影响第13-14页
    · 转基因作物对靶标生物的抗性风险第14页
  · Bt杀虫蛋白基因第14-17页
    · Bt杀虫蛋白基因的分类第15页
    · Bt杀虫蛋白的分子结构第15-16页
    · 杀虫晶体蛋白的作用机制第16-17页
  · 外源基因在大肠杆菌中高效表达策略第17-20页
    · 基因改造第17-18页
    · 表达系统特性对表达的影响第18-19页
    · 外源基因与系统间的相互作用第19-20页
    · 培养条件的控制第20页
  · 研究总体概述第20-23页
    · 研究目的意义第20页
    · 研究内容第20-23页
第二章 转基因棉花中外源基因cry1Ac在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究第23-47页
  · 实验材料第23-26页
    · 供试材料第23页
    · 菌株和质粒第23-24页
    · 试剂盒第24页
    · 酶、试剂、引物及测序第24页
    · 常用溶液配置第24页
    · SDS-PAGE溶液第24-25页
    · 纯化缓冲液第25页
    · Western blot第25-26页
    · 培养基第26页
  · 实验方法第26-34页
    · 植物叶片组织基因组DNA小量提取第26页
    · 基因组DAN的PCR扩增第26-27页
    · 琼脂糖凝胶中扩增片段回收第27页
    · 目的片段与pMD19-T的连接成重组质粒第27-28页
    · 大肠杆菌感受态细胞制备第28页
    · 重组质粒大肠杆菌的转化第28页
    · 质粒DNA提取第28-29页
    · 质粒酶切验证第29页
    · 基因序列测定与cry1Ac人工全基因合成第29页
    · cry1Ac融合表达载体的构建第29-30页
    · 蛋白诱导表达第30页
    · SDS-PAGE检测蛋白表达效果第30-31页
    · Cry1Ac蛋白纯化第31-32页
    · Western blot第32页
    · BCA法测总蛋白含量第32-33页
    · ELISA法测定Bt蛋白含量第33页
    · 棉铃虫幼虫对大肠杆菌中Cry1Ac蛋白敏感性测定第33-34页
  · 结果与分析第34-43页
    · 转基因棉花中外源基因cry1Ac(未优化)克隆及其在大肠杆菌中的表达第34-37页
    · 人工合成基因cry1Ac(优化)克隆及其在大肠杆菌中表达第37-40页
    · ELISA定量测定不同载体Cry1Ac蛋白表达量第40-42页
    · 不同长度Bt基因(Cry1Ab/c和Cry1Ac)在大肠杆菌中表达量第42页
    · 棉铃虫毒性实验第42-43页
  · 讨论第43-47页
第三章 转cry1Ac基因拟南芥植株的获得和验证第47-55页
  · 实验材料第47-48页
    · 供试材料第47页
    · 菌株和质粒第47页
    · 试剂盒第47-48页
    · 酶、试剂、引物及测序第48页
    · 常用溶液配置第48页
    · 培养基第48页
  · 试验方法第48-51页
    · cry1Ac基因引物的设计与PCR扩增第48页
    · 琼脂糖凝胶中扩增片段回收第48页
    · 重组质粒pMD19-cry1Ac_转构建第48页
    · 重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5a第48页
    · 质粒的提取第48页
    · 质粒酶切验证第48-49页
    · 质粒连接反应第49页
    · cry1Ac转拟南芥融合表达载体构建第49页
    · 农杆菌感受态细胞制备第49-50页
    · 重组质粒农杆菌的转化第50页
    · 拟南芥的种植生长第50页
    · 菌液侵染拟南芥花序第50-51页
  · 结果与分析第51-53页
    · 植物表达载体构建第51-53页
    · 拟南芥转化植株的筛选与鉴定第53页
  · 讨论第53-55页
第四章 全文总结第55-57页
参考文献第57-65页
附录第65-69页
致谢第69页

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