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小麦根TaNRT2.1基因的抗原决定簇片段与原核表达载体的构建及在E.coli中的诱导和纯化
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小麦根TaNRT2.1基因的抗原决定簇片段与原核表达载体的构建及在E.coli中的诱导和纯化
论文目录
 
摘要第1-5 页
Abstract第5-6 页
缩略词一览表第6-7 页
一. 文献综述第7-21 页
　　1 引言第7 页
　　2 植物氮素吸收与同化代谢途径第7-8 页
　　　　· 根细胞中氮素吸收与同化第7 页
　　　　· 叶肉细胞中氮素吸收与同化第7-8 页
　　3 高等植物NO_3~-吸收转运系统第8-13 页
　　　　· 低亲和NO_3~-吸收转运系统(LATS)第9 页
　　　　· 高亲和NO_3~-吸收转运系统(HATS)第9-12 页
　　　　· 亲和NO_3~-吸收转运系统(DATS)第12-13 页
　　4 TaNRT2.1蛋白的结构预测第13-16 页
　　　　· 从氨基酸组成辨识蛋白质第13-14 页
　　　　· 预测蛋白质的物理性质第14 页
　　　　· 蛋白质二级结构预测第14-15 页
　　　　· 其它特殊局部结构第15 页
　　　　· 蛋白质的三维结构第15-16 页
　　　　· 细胞定位预测第16 页
　　5 本实验室以往的工作第16-19 页
　　6 本研究的目的和意义第19-21 页
二. 材料和试剂第21-24 页
　　1 实验材料第21 页
　　2 酶及抗生素第21 页
　　3 常用试剂第21-24 页
三. 方法和步骤第24-33 页
　　1 重组质粒的构建第24-28 页
　　　　· pGEX-2T质粒的提取(小量提取法)第24 页
　　　　· 琼脂糖凝胶电泳第24-25 页
　　　　· pGEX-2T质粒的酶切第25 页
　　　　· 玻璃奶法回收凝胶中的DNA片段第25 页
　　　　· 酶切产物5`端去磷酸化第25-26 页
　　　　· 外源片段的设计及人工合成第26-27 页
　　　　· 外源片段与质粒载体的连接第27 页
　　　　· 感受态细胞的制备第27-28 页
　　　　· 重组质粒的转化和抗性筛选第28 页
　　　　· 重组质粒的提取第28 页
　　　　· 重组质粒的单酶切鉴定第28 页
　　2 重组蛋白的诱导表达及检测纯化第28-31 页
　　　　· 重组蛋白的诱导表达第28-29 页
　　　　· 重组蛋白的检测第29-30 页
　　　　· 重组蛋白的纯化第30-31 页
　　3 包涵体的处理第31-33 页
　　　　· 细菌的裂解(超声波破碎法)第31-32 页
　　　　· 包涵体的分离第32 页
　　　　· 包涵体的变性和复性第32-33 页
四. 结果和讨论第33-51 页
　　1 质粒载体pGEX-2T的酶切鉴定第33 页
　　2 质粒载体双酶切后的酶切鉴定第33-34 页
　　3 重组质粒的酶切鉴定第34 页
　　4 重组质粒的测序鉴定第34-35 页
　　5 融合蛋白的诱导表达第35-37 页
　　　　· 表达某一种特定蛋白质的大肠杆菌系统的选择第36-37 页
　　　　· 不溶性蛋白的处理第37 页
　　6 融合蛋白的纯化第37-40 页
　　　　· 谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化GST融合蛋白第37-38 页
　　　　· 云南旺源WyMag-GST磁珠纯化GST融合蛋白第38-39 页
　　　　· 纯化融合蛋白第39 页
　　　　· 切割融合蛋白第39-40 页
　　7 包涵体的变复性第40-44 页
　　　　· 包涵体的形成第41 页
　　　　· 包涵体的分离、洗涤及溶解第41-42 页
　　　　· 包涵体蛋白的复性第42-44 页
　　8 TaNRT2.1蛋白的预测结果第44-51 页
　　　　· TaNRT·蛋白物理性质的预测第44-45 页
　　　　· TaNRT·蛋白的二级结构分析结果第45-46 页
　　　　· TaNRT·蛋白的特殊结构第46-49 页
　　　　· TaNRT·蛋白的三维结构预测第49-50 页
　　　　· TaNRT·蛋白的亚细胞定位预测第50-51 页
五. 结论和展望第51-52 页
六. 参考文献第52-58 页
七. 致谢第58-59 页
八. 附录第59-61页

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