传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆、表达及ELISA抗体检测方法的建立

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传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆、表达及ELISA抗体检测方法的建立

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传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆、表达及ELISA抗体检测方法的建立

论文目录
摘要	第1-8 页
ABSTRACT	第8-9 页
缩略词表	第9-10 页
第一章文献综述	第10-31 页
1 概述	第10-11 页
2 IBDV的病原学特性	第11-12 页
· 病毒学分类与结构特性	第11 页
· 理化特性	第11-12 页
· 生物学特性	第12 页
3 IBDV的致病机理	第12-14 页
4 分子生物学研究进展	第14-21 页
· IBDV基因组结构	第14-15 页
· 病毒蛋白及其功能	第15-19 页
· 病毒抗原变异的分子基础	第19 页
· IBDV毒力变异的分子基础	第19-21 页
5 IBD的诊断	第21-23 页
· 流行病学	第21 页
· 临床症状	第21 页
· 病理变化	第21 页
· IBD诊断方法的研究进展	第21-23 页
6 IBD的防制	第23-30 页
· 常规疫苗免疫	第24-25 页
· 新型传染性法氏囊病疫苗研究进展	第25-29 页
· 免疫防制中存在的问题及对策	第29-30 页
7 结束语	第30-31 页
第二章传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆与表达	第31-54 页
1 研究目的与意义	第31 页
2 材料与方法	第31-43 页
· 材料	第31-36 页
· 病毒、质粒、细菌及抗体	第31 页
· 工具酶及主要生物学试剂	第31-33 页
· 主要试剂及溶液的配制	第33-36 页
· 实验方法	第36-43 页
· 引物的设计与合成	第36 页
· 病毒的增殖、收获及纯化	第36 页
· 病毒RNA提取	第36-37 页
· RT-PCR扩增及检测	第37 页
· DNA片段的回收	第37 页
· 回收的目的DNA片段与克隆载体pMD18-T的连接反应	第37-38 页
· 大肠杆菌感受态细胞的制备	第38 页
· 连接产物的转化	第38 页
· 质粒的制备	第38-39 页
· 重组质粒的鉴定与序列分析	第39-40 页
· 重组表达质粒的构建	第40-41 页
· 诱导表达	第41 页
· 表达产物的鉴定	第41-43 页
3 结果与分析	第43-49 页
· VP2基因的RT-PCR扩增结果	第43 页
· 克隆质粒的酶切鉴定	第43 页
· 序列测定分析及系统发育进化树	第43-47 页
· 表达载体的构建与鉴定	第47 页
· 表达产物的SDS-PAGE和Western blot结果	第47-49 页
· 重组菌菌体裂解物的SDS-PAGE电泳结果	第47-48 页
· Western blot分析	第48-49 页
· 蛋白浓度的测定	第49 页
4 讨论与结论	第49-54 页
· IBDV dsRNA的提取与VP2基因的扩增	第49-50 页
· IBDV VP2基因的克隆	第50 页
· VP2基因原核表达载体的构建	第50-51 页
· VP2蛋白的表达、提取与纯化	第51 页
· 包涵体的提取及溶解复性	第51-53 页
· 小结	第53-54 页
第三章 ELISA方法的建立与临床应用	第54-64 页
1 研究目的与意义	第54-55 页
2 材料与方法	第55-58 页
· 材料	第55 页
· 标准血清和酶标抗体	第55 页
· ELISA试剂的配制	第55 页
· 主要实验器材	第55 页
· 方法	第55-58 页
· IBD-ELISA最佳工作条件的确定	第55-57 页
· 间接ELISA测定的基本实验步骤	第57 页
· 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定	第57 页
· 重复性试验	第57 页
· 特异性试验	第57-58 页
· 临床血清样品的检测	第58 页
3 结果与分析	第58-62 页
· ELISA最佳条件及阴阳性界限的确定	第58-61 页
· 反应板均一性测定	第58 页
· 最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定	第58-59 页
· 酶标抗体工作浓度的确定	第59 页
· 封闭液的选择及封闭时间的确定	第59-60 页
· 阴阳性血清反应时间的确定	第60 页
· 酶标二抗的作用时间的确定	第60-61 页
· 底物反应时间的确定	第61 页
· 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定	第61 页
· 重复性试验	第61 页
· 特异性试验	第61-62 页
· 临床送检血清的ELISA检测结果	第62 页
4 讨论与结论	第62-64 页
参考文献	第64-72 页
致谢	第72 页

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