论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9
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| Abstract | 第9-11
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| 缩略词表 | 第11-13
页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-32
页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第13-24
页 |
| 1 猪圆环病毒的发现与命名 | 第13
页 |
| 2 猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第13-14
页 |
| 3 猪圆环病毒的形态结构与理化性质 | 第14
页 |
| 4 猪圆环病毒的培养特性 | 第14-15
页 |
| 5 猪圆环病毒的分子生物学研究 | 第15-17
页 |
| · 猪圆环病毒的基因组 | 第15
页 |
| · 猪圆环病毒的复制 | 第15-16
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| · 猪圆环病毒编码主要蛋白 | 第16-17
页 |
| · Rep蛋白 | 第16-17
页 |
| · Cap蛋白 | 第17
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| 6 PCV2相关疾病 | 第17-20
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| · 断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) | 第17-19
页 |
| · 猪皮炎和肾病综合症(PDNS) | 第19
页 |
| · A2型先天性震颤(CT) | 第19-20
页 |
| · 繁殖障碍(RF) | 第20
页 |
| · 猪增生性和坏死性肺炎(PNP) | 第20
页 |
| 7 猪圆环病毒检测方法研究进展 | 第20-24
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| · 病毒分离 | 第20-21
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| · 间接免疫荧光(Immunofluorescence assay,IFA) | 第21
页 |
| · 原位杂交技术(In situ hybridization,ISH) | 第21
页 |
| · 酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第21-22
页 |
| · 聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR) | 第22-24
页 |
| 第二章 猪瘟病毒研究进展 | 第24-31
页 |
| 1 猪瘟病毒的分类地位 | 第24
页 |
| 2 CSFV的形态结构与理化性质 | 第24-25
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| 3 CSFV的培养特性 | 第25
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| 4 猪瘟病毒的分子生物学研究 | 第25-29
页 |
| · 猪瘟病毒的基因组 | 第25
页 |
| · CSFV编码蛋白及其功能 | 第25-29
页 |
| · 核衣壳蛋白C(p14) | 第26
页 |
| · E0蛋白 | 第26-27
页 |
| · E1蛋白 | 第27
页 |
| · E2蛋白 | 第27-29
页 |
| 5 猪瘟病毒的诊断 | 第29-31
页 |
| · 病毒分离 | 第29
页 |
| · 动物接种试验 | 第29
页 |
| · 免疫荧光试验 | 第29
页 |
| · ELISA试验 | 第29-30
页 |
| · CSFV基因组检测法 | 第30-31
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| 第三章 本研究的目的与意义 | 第31-32
页 |
| 第二部分 研究内容 | 第32-63
页 |
| 第一章 猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因和猪瘟病毒E2基因的原核表达及纯化 | 第32-51
页 |
| 1 材料 | 第32-37
页 |
| · 菌株与毒株 | 第32
页 |
| · 主要试剂 | 第32
页 |
| · 工具酶 | 第32
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| · 其它试剂 | 第32
页 |
| · 主要仪器设备 | 第32-33
页 |
| · 常用溶液 | 第33-34
页 |
| · SDS-PAGE相关试剂和溶液 | 第34
页 |
| · SDS-PAGE胶的配制 | 第34-35
页 |
| · 蛋白纯化相关试剂和溶液 | 第35-36
页 |
| · Western Blot相关试剂和溶液 | 第36-37
页 |
| 2 方法 | 第37-44
页 |
| · 表达载体的构建 | 第37-41
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第37
页 |
| · PCR扩增与回收 | 第37-39
页 |
| · 将Cap和E2基因片段分别插入表达载体 | 第39-40
页 |
| · 将重组质粒转化克隆宿主菌,筛选阳性克隆 | 第40-41
页 |
| · 融合蛋白Cap和E2的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第41-42
页 |
| · 透析袋的处理 | 第42
页 |
| · 融合蛋白Cap和E2的纯化 | 第42-43
页 |
| · 蛋白浓度的测定 | 第43
页 |
| · Western blot免疫印记鉴定表达蛋白 | 第43-44
页 |
| 3 结果 | 第44-49
页 |
| · Cap、E2基因的扩增 | 第44
页 |
| · 重组质粒的酶切鉴定 | 第44-46
页 |
| · 重组质粒的测序鉴定 | 第46
页 |
| · 蛋白诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第46-47
页 |
| · Western blot免疫印记分析 | 第47-48
页 |
| · 表达产物的定量 | 第48-49
页 |
| 4 讨论 | 第49-50
页 |
| 5 结论 | 第50-51
页 |
| 第二章 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白、猪瘟病毒E2蛋白为抗原的间接ELISA方法的建立与初步应用 | 第51-63
页 |
| 1 材料 | 第51-52
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| 2 方法 | 第52-54
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| · 间接ELISA的基本操作程序 | 第52
页 |
| · 间接ELISA反应条件的优化 | 第52-53
页 |
| · 间接ELISA临界值的确定 | 第53
页 |
| · ELISA重复性试验 | 第53
页 |
| · 临床样品测定 | 第53-54
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| · 间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒检测CSFV的符合率试验 | 第54
页 |
| 3 结果 | 第54-61
页 |
| · 间接ELISA反应条件的优化 | 第54-57
页 |
| · 间接ELISA临界值的确定 | 第57-58
页 |
| · 间接ELISA重复性测定 | 第58-60
页 |
| · 临床样品检测 | 第60-61
页 |
| · 间接ELISA与进口阻断ELISA抗体试剂盒检测CSFV的符合率试验 | 第61
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| 4 讨论 | 第61-62
页 |
| 5 结论 | 第62-63
页 |
| 参考文献 | 第63-72
页 |
| 致谢 | 第72
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