论文目录 | |
目录 | 第1-7
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中文摘要 | 第7-9
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ABSTRACT | 第9-13
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第一部分 文献综述 | 第13-36
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1 杀菌/通透性增加蛋白的研究进展 | 第13-19
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· 引言 | 第13
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· BPI的发现与分布 | 第13-14
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· BPI的分子结构及作用机理 | 第14-15
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· BPI的生理功能 | 第15-18
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· BPI的应用前景 | 第18-19
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2 动物防御素的研究进展 | 第19-34
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· 引言 | 第19
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· 防御素的种类和分布 | 第19-24
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· 动物防御素的分子结构特征 | 第24-27
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· 动物防御素基因的染色体定位及其表达调控 | 第27-28
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· 防御素的生理功能及作用机制 | 第28-32
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· 防御素的应用前景 | 第32-34
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3 目的与意义 | 第34-36
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第二部分 试验部分 | 第36
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试验Ⅰ. 荷斯坦奶牛BPI基因的克隆 | 第36-49
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1 试验材料 | 第36-39
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· 试验材料的来源 | 第36
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· 限制性内切酶 | 第36-37
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· 主要试剂及其配制 | 第37-38
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· 主要仪器设备 | 第38-39
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2 试验方法 | 第39-45
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· 荷斯坦奶牛血液白细胞总RNA的提取 | 第39
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· 总RNA的检测 | 第39-40
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· 总RNA的纯化 | 第40
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· 反转录 | 第40-41
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· cDNA看家基因的检测 | 第41
页 |
· BPI基因的PCR扩增 | 第41-43
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· pEASY-T1-BPI克隆质粒的构建 | 第43-45
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3 试验结果 | 第45-48
页 |
· 荷斯坦牛血液白细胞总RNA提取 | 第45
页 |
· 反转录检测 | 第45
页 |
· BPI扩增产物 | 第45-47
页 |
· pEASY-T1-BPI质粒的提取 | 第47
页 |
· pEASY-T1-BPI质粒的双酶切鉴定 | 第47-48
页 |
· pEASY-T1-BPI质粒测序结果 | 第48
页 |
4 小结 | 第48-49
页 |
试验Ⅱ. 荷斯坦牛BNBD4基因的克隆 | 第49-54
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1 试验材料 | 第49
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2 试验方法 | 第49-51
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· BNBD4基因的PCR扩增 | 第49-50
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· pBluescript-BNBD4克隆质粒的构建 | 第50-51
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3 试验结果 | 第51-53
页 |
· BNBD4扩增产物 | 第51
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· pBluescript-BNBD4质粒的提取 | 第51-52
页 |
· pBluescrpt-BNBD4质粒的双酶切鉴定 | 第52-53
页 |
· pBluescript-BNBD4质粒测序结果 | 第53
页 |
4 小结 | 第53-54
页 |
试验Ⅲ. pET-BPI-BNBD4融合表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达、纯化和活性试验 | 第54-76
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1 试验材料 | 第54-56
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· 质粒和菌株 | 第54
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· 限制性内切酶 | 第54
页 |
· 主要溶液及其配制 | 第54-55
页 |
· 主要仪器设备 | 第55-56
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2 试验方法 | 第56-63
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· pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收 | 第56-57
页 |
· 表达载体pET-28a(+)的线性化及其双酶切产物的回收 | 第57
页 |
· 重组质粒pET-BPI的构建 | 第57-58
页 |
· 重组质粒pET-BPI的线性化及其双酶切产物的回收 | 第58
页 |
· 融合质粒pET-BPI-BNBD4的构建 | 第58-60
页 |
· 融合质粒pET-BPI-BNBD4在大肠杆菌中的诱导表达 | 第60-62
页 |
· 融合蛋白体外活性试验 | 第62-63
页 |
3 试验结果 | 第63-75
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· pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收 | 第63
页 |
· 表达载体pET-28a(+)的线性化 | 第63-64
页 |
· 重组质粒pET-BPI的提取 | 第64-65
页 |
· 重组质粒pET-BPI测序结果 | 第65
页 |
· 重组质粒pET-BPI的线性化 | 第65
页 |
· 融合质粒pET-BPI-BNBD4的提取 | 第65-66
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· 融合质粒pET-BPI-BNBD4双酶切鉴定 | 第66-67
页 |
· 融合质粒pET-BPI-BNBD4测序图 | 第67-68
页 |
· 融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第68-69
页 |
· 融合蛋白的Western blot鉴定 | 第69
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· 融合蛋白的生物信息学分析 | 第69-73
页 |
· 融合蛋白体外活性试验 | 第73-75
页 |
4 小结 | 第75-76
页 |
讨论 | 第76-82
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1 基因的扩增 | 第76
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2 融合表达载体的构建 | 第76-77
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3 融合蛋白的表达 | 第77-78
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4 融合蛋白的生物信息学分析 | 第78
页 |
5 融合蛋白体外活性试验 | 第78-82
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总结 | 第82-83
页 |
1 已做工作总结 | 第82
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2 下一步工作计划 | 第82-83
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参考文献 | 第83-91
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致谢 | 第91-92
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附录 | 第92-101
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