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牛杀菌—通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达

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牛杀菌—通透性增加蛋白和防御素基因融合质粒的构建及其在大肠杆菌中表达
论文目录
 
目录第1-7 页
中文摘要第7-9 页
ABSTRACT第9-13 页
第一部分 文献综述第13-36 页
  1 杀菌/通透性增加蛋白的研究进展第13-19 页
    · 引言第13 页
    · BPI的发现与分布第13-14 页
    · BPI的分子结构及作用机理第14-15 页
    · BPI的生理功能第15-18 页
    · BPI的应用前景第18-19 页
  2 动物防御素的研究进展第19-34 页
    · 引言第19 页
    · 防御素的种类和分布第19-24 页
    · 动物防御素的分子结构特征第24-27 页
    · 动物防御素基因的染色体定位及其表达调控第27-28 页
    · 防御素的生理功能及作用机制第28-32 页
    · 防御素的应用前景第32-34 页
  3 目的与意义第34-36 页
第二部分 试验部分第36 页
试验Ⅰ. 荷斯坦奶牛BPI基因的克隆第36-49 页
  1 试验材料第36-39 页
    · 试验材料的来源第36 页
    · 限制性内切酶第36-37 页
    · 主要试剂及其配制第37-38 页
    · 主要仪器设备第38-39 页
  2 试验方法第39-45 页
    · 荷斯坦奶牛血液白细胞总RNA的提取第39 页
    · 总RNA的检测第39-40 页
    · 总RNA的纯化第40 页
    · 反转录第40-41 页
    · cDNA看家基因的检测第41 页
    · BPI基因的PCR扩增第41-43 页
    · pEASY-T1-BPI克隆质粒的构建第43-45 页
  3 试验结果第45-48 页
    · 荷斯坦牛血液白细胞总RNA提取第45 页
    · 反转录检测第45 页
    · BPI扩增产物第45-47 页
    · pEASY-T1-BPI质粒的提取第47 页
    · pEASY-T1-BPI质粒的双酶切鉴定第47-48 页
    · pEASY-T1-BPI质粒测序结果第48 页
  4 小结第48-49 页
试验Ⅱ. 荷斯坦牛BNBD4基因的克隆第49-54 页
  1 试验材料第49 页
  2 试验方法第49-51 页
    · BNBD4基因的PCR扩增第49-50 页
    · pBluescript-BNBD4克隆质粒的构建第50-51 页
  3 试验结果第51-53 页
    · BNBD4扩增产物第51 页
    · pBluescript-BNBD4质粒的提取第51-52 页
    · pBluescrpt-BNBD4质粒的双酶切鉴定第52-53 页
    · pBluescript-BNBD4质粒测序结果第53 页
  4 小结第53-54 页
试验Ⅲ. pET-BPI-BNBD4融合表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达、纯化和活性试验第54-76 页
  1 试验材料第54-56 页
    · 质粒和菌株第54 页
    · 限制性内切酶第54 页
    · 主要溶液及其配制第54-55 页
    · 主要仪器设备第55-56 页
  2 试验方法第56-63 页
    · pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收第56-57 页
    · 表达载体pET-28a(+)的线性化及其双酶切产物的回收第57 页
    · 重组质粒pET-BPI的构建第57-58 页
    · 重组质粒pET-BPI的线性化及其双酶切产物的回收第58 页
    · 融合质粒pET-BPI-BNBD4的构建第58-60 页
    · 融合质粒pET-BPI-BNBD4在大肠杆菌中的诱导表达第60-62 页
    · 融合蛋白体外活性试验第62-63 页
  3 试验结果第63-75 页
    · pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收第63 页
    · 表达载体pET-28a(+)的线性化第63-64 页
    · 重组质粒pET-BPI的提取第64-65 页
    · 重组质粒pET-BPI测序结果第65 页
    · 重组质粒pET-BPI的线性化第65 页
    · 融合质粒pET-BPI-BNBD4的提取第65-66 页
    · 融合质粒pET-BPI-BNBD4双酶切鉴定第66-67 页
    · 融合质粒pET-BPI-BNBD4测序图第67-68 页
    · 融合蛋白的SDS-PAGE检测第68-69 页
    · 融合蛋白的Western blot鉴定第69 页
    · 融合蛋白的生物信息学分析第69-73 页
    · 融合蛋白体外活性试验第73-75 页
  4 小结第75-76 页
讨论第76-82 页
  1 基因的扩增第76 页
  2 融合表达载体的构建第76-77 页
  3 融合蛋白的表达第77-78 页
  4 融合蛋白的生物信息学分析第78 页
  5 融合蛋白体外活性试验第78-82 页
总结第82-83 页
  1 已做工作总结第82 页
  2 下一步工作计划第82-83 页
参考文献第83-91 页
致谢第91-92 页
附录第92-101 页

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