论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
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| ABSTRACT | 第7-9
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| 缩略语表(Abbreviation) | 第9-10
页 |
| 1 文献综述 | 第10-24
页 |
| · 哺乳动物防御素研究进展 | 第10-13
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| · 哺乳动物防御素的分类与分布 | 第10-11
页 |
| · 哺乳动物防御素的分子结构与进化特性 | 第11-12
页 |
| · 哺乳动物防御素的作用机理和生物活性 | 第12-13
页 |
| · 猪β-防御素(pBD)的研究进展 | 第13-18
页 |
| · 猪β-防御素的分类 | 第13-14
页 |
| · 猪β-防御素的结构特征 | 第14-15
页 |
| · 猪β-防御素的抗菌活性与作用机理 | 第15-16
页 |
| · 猪β-防御素克隆表达 | 第16-17
页 |
| · 猪β-防御素发展前景 | 第17-18
页 |
| · 毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第18-22
页 |
| · 表达宿主和载体 | 第18-19
页 |
| · 外源基因的整合 | 第19-20
页 |
| · 外源基因的表达 | 第20
页 |
| · 毕赤酵母表达系统特点 | 第20-21
页 |
| · 毕赤酵母表达系统高表达策略 | 第21-22
页 |
| · 研究目的与意义 | 第22-24
页 |
| 2 猪β-防御素-2成熟肽基因酵母工程菌的构建和表达 | 第24-49
页 |
| · 材料 | 第24-27
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| · 质粒和菌株 | 第24
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| · 主要仪器设备 | 第24
页 |
| · 主要试剂及配制 | 第24-27
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| · 主要应用的软件 | 第27
页 |
| · 引物列表 | 第27
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| · 方法 | 第27-39
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| · pBD-2成熟肽基因片段的设计 | 第27-28
页 |
| · pBD-2成熟肽基因的PCR扩增 | 第28-29
页 |
| · 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29
页 |
| · pPIC9k-GST重组质粒的构建和鉴定 | 第29-30
页 |
| · pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2重组载体的构建和鉴定 | 第30-31
页 |
| · 含有pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2质粒的阳性菌落的筛选 | 第31-32
页 |
| · 毕赤酵母工程菌的构建 | 第32-35
页 |
| · pBD-2基因在毕赤酵母KM71中的表达 | 第35
页 |
| · Tricine-SDS-PAGE凝胶的制备及酵母表达上清液的蛋白电泳鉴定 | 第35-37
页 |
| · GST-pBD-2成熟肽的WesternBlot检测 | 第37-38
页 |
| · pBD-2表达上清的抑菌活性检测 | 第38-39
页 |
| · 结果 | 第39-46
页 |
| · pBD-2基因的PCR扩增与双酶切 | 第39
页 |
| · GST基因的PCR扩增与双酶切 | 第39
页 |
| · pPIC9k载体的双酶切 | 第39-40
页 |
| · pPIC9k-GST-pBD-2重组载体的鉴定 | 第40-41
页 |
| · pPIC9k-pBD-2重组载体的鉴定 | 第41-42
页 |
| · 重组毕赤酵母工程菌的筛选与鉴定 | 第42-44
页 |
| · 重组酵母蛋白表达 | 第44-45
页 |
| · GST-pBD-2蛋白的WesternBlot验证 | 第45
页 |
| · pBD-2成熟肽的抑菌活性检测 | 第45-46
页 |
| · 讨论 | 第46-48
页 |
| · pBD-2成熟肽基因的设计 | 第46
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| · pPIC9k-GST-pBD-2和pPIC9k-pBD-2重组载体的构建 | 第46-47
页 |
| · 毕赤酵母表达 | 第47-48
页 |
| · pBD-2活性检测 | 第48
页 |
| · 结论 | 第48-49
页 |
| 参考文献 | 第49-55
页 |
| 致谢 | 第55
页 |
