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重组真菌细胞色素P450nor2的表达纯化及多克隆抗体的制备
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重组真菌细胞色素P450nor2的表达纯化及多克隆抗体的制备
论文目录
 
中文摘要第1-4页
英文摘要第4-9页
1 前言第9-18页
　　· 细胞色素P450第9-16页
　　　　· 细胞色素P450的研究简史第9-11页
　　　　· 真菌细胞色素P450nor及其研究进展第11-15页
　　　　· 真菌反硝化第15-16页
　　· 杆状病毒表达载体系统第16-18页
　　　　· 原理第16-17页
　　　　· Bac-to-Bac表达系统第17-18页
2 实验材料和方法第18-30页
　　· 实验材料第18-21页
　　　　· 菌株和质粒第18页
　　　　· 野生型病毒和细胞第18页
　　　　· 化学试剂及抗菌素第18页
　　　　· 常用贮存液第18页
　　　　· 限制性内切酶及其它工具酶第18-19页
　　　　· 培养基第19页
　　　　· 常用缓冲液第19-21页
　　　　· Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱第21页
　　· 实验方法第21-30页
　　　　· 质粒DNA的提取第21-22页
　　　　· DNA限制性内切酶消化第22-23页
　　　　· DNA片段的回收第23页
　　　　· DNA片段的连接第23页
　　　　· 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第23-24页
　　　　· 重组质粒的筛选第24页
　　　　· 蛋白质的原核表达第24页
　　　　· 表达产物的SDS-PAGE分析第24-25页
　　　　· Western-blot分析第25页
　　　　· 目的蛋白的大量制备第25页
　　　　· Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化第25-26页
　　　　· 抗体的制备与效价的测定第26-27页
　　　　· MTT方法检测细胞存活数第27页
　　　　· 蛋白质与NO含量的测定第27页
　　　　· 质粒DNA的转座第27-28页
　　　　· 重组穿梭载体Bacmid DNA(＞100 kb)的提取与制备第28页
　　　　· 重组穿梭载体Bacmid转染Sf9细胞第28-29页
　　　　· PCR检测第29页
　　　　· 真核表达产物的SDS-PAGE第29-30页
3 实验结果第30-41页
　　· 重组原核表达质粒pET-P450nor的构建和表达第30-33页
　　　　· 重组表达质粒pET-P450nor的构建第30页
　　　　· 重组表达质粒pET-P450nor的鉴定第30页
　　　　· P450nor基因在大肠杆菌E.coli BL21中的表达与鉴定第30-33页
　　· 原核表达的细胞色素P450nor的分离纯化第33-34页
　　　　· 重组细胞色素P450nor的分离纯化第33页
　　　　· 重组细胞色素P450nor的纯化效果的鉴定第33-34页
　　· 抗体效价的测定第34-35页
　　· 重组P450nor对肿瘤细胞增殖的抑制第35页
　　· 重组真核表达病毒pAc-P450nor的构建和表达第35-41页
　　　　· 重组转移载体pFast-P450nor的构建与酶切鉴定第35-38页
　　　　· 重组bacmid的PCR分析第38-39页
　　　　· 重组P450nor的表达与免疫学分析第39-41页
4 讨论第41-46页
　　· 目的基因的原核高效表达第41-42页
　　　　· 表达高效载体的pET第41页
　　　　· 表达量的优化第41-42页
　　· 亲和层析第42-43页
　　· 目的基因对肿瘤细胞生长的抑制第43-44页
　　· Bac-to-Bac表达系统的建立及应用第44-46页
参考文献第46-51页
硕士期间发表的论文第51-52页
致谢第52 页

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