论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩写表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1 肠上皮细胞培养现状 | 第13-15页 |
| · 小肠上皮细胞的结构 | 第13页 |
| · IEC的主要功能 | 第13页 |
| · IEC的体外培养 | 第13-14页 |
| · IEC培养的研究现状 | 第14-15页 |
| 2. 益生菌与抗菌肽的关系 | 第15-19页 |
| · 抗菌肽 | 第15-17页 |
| · 抗菌肽分类及抗菌作用 | 第15-16页 |
| · 展望 | 第16-17页 |
| · 益生菌 | 第17-18页 |
| · 益生菌的作用 | 第17-18页 |
| · 乳酸杆菌形态 | 第18页 |
| · 乳酸杆菌与肠上皮细胞黏附关系 | 第18-19页 |
| · 乳酸杆菌作用于上皮细胞的机理 | 第18页 |
| · 乳酸杆菌黏附具有菌株差异性 | 第18-19页 |
| 3. 实时荧光定量 | 第19-21页 |
| · FQ-PCR技术的原理 | 第19-20页 |
| · FQ-PCR技术的两种定量形式 | 第20页 |
| · FQ-PCR技术的主要种类 | 第20-21页 |
| · FQ-PCR的应用 | 第21页 |
| 4. 包涵体(inclusion body)蛋白纯化 | 第21-22页 |
| · 包涵体蛋白的形成 | 第21页 |
| · 包涵体的分离纯化 | 第21-22页 |
| · 包涵体的分离 | 第21-22页 |
| · 包涵体的纯化 | 第22页 |
| 5. 研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养 | 第23-35页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| · 实验材料 | 第23-25页 |
| · 实验动物 | 第23-24页 |
| · 主要试剂 | 第24页 |
| · 主要仪器与设备 | 第24页 |
| · 试剂配制 | 第24-25页 |
| · 方法与步骤 | 第25-28页 |
| · 小肠上皮细胞的分离与培养 | 第25-26页 |
| · 细胞生长与增殖 | 第26页 |
| · 小肠上皮细胞形态学观察 | 第26页 |
| · 小肠上皮细胞鉴定 | 第26-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-32页 |
| · 鸡小肠上皮细胞的分离 | 第28-29页 |
| · 鸡小肠上皮细胞形态特征 | 第29-30页 |
| · 细胞的生长及增殖 | 第30-31页 |
| · 上皮细胞鉴定结果 | 第31-32页 |
| · 碱性磷酸酶鉴定结果 | 第31页 |
| · 免疫组化鉴定结果 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| · 鸡小肠上皮细胞的分离 | 第32-33页 |
| · 材料来源及取材要求 | 第32页 |
| · 消化酶的选择及消化时间的确定 | 第32-33页 |
| · 各添加因素对鸡胚小肠上皮细胞培养的影响 | 第33页 |
| · 小肠上皮细胞的纯化 | 第33-34页 |
| 4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 鸡抗菌肽AvBD9的融合表达及其多克隆抗体制备与鉴定 | 第35-48页 |
| 1 实验材料与方法 | 第35-42页 |
| · 实验材料 | 第35-38页 |
| · 实验动物 | 第35页 |
| · 载体及宿主 | 第35-36页 |
| · 主要试剂 | 第36页 |
| · 主要仪器设备 | 第36页 |
| · 试剂配制 | 第36-38页 |
| · 实验方法与步骤 | 第38-42页 |
| · 重组载体的构建 | 第38-40页 |
| · 融合蛋白的诱导表达及AvBD9蛋白分离、纯化 | 第40-41页 |
| · 多克隆抗体的制备 | 第41页 |
| · 抗血清的抗体滴度测定 | 第41-42页 |
| · Western-blot检测抗体特异性 | 第42页 |
| 2 结果及分析 | 第42-46页 |
| · 重组质粒pGEX-6P-AvBD9的鉴定 | 第42-43页 |
| · 融合蛋白的分离与纯化 | 第43-46页 |
| · 融合蛋白分离与鉴定 | 第43-44页 |
| · 融合蛋白纯化 | 第44-45页 |
| · 纯化的GST-AvBD9蛋白浓度测定 | 第45-46页 |
| · GST-AvBD9抗血清效价的测定 | 第46页 |
| · Western-blot鉴定结果 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 乳酸杆菌对鸡小肠上皮细胞抗菌肽AvBD9基因表达的影响 | 第48-66页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| · 实验材料 | 第49-50页 |
| · 小肠上皮细胞及供试菌株 | 第49页 |
| · 培养基 | 第49页 |
| · 主要试剂 | 第49页 |
| · 主要仪器设备 | 第49-50页 |
| · 实验方法 | 第50-52页 |
| · 乳酸杆菌的培养与鉴定 | 第50页 |
| · 抗菌肽AvBD9 mRNA表达水平的检测 | 第50-52页 |
| · Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第52页 |
| · Western blot检测培养上清中AvBD9的表达 | 第52页 |
| · 数据处理 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-62页 |
| · 乳酸杆菌的鉴定 | 第53-57页 |
| · 肠上皮细胞总RNA的提取 | 第57-58页 |
| · 实时荧光定量PCR结果 | 第58-61页 |
| · 不同浓度的活乳酸杆菌对AvBD9 mRNA表达的影响 | 第58-59页 |
| · 鼠李糖乳杆菌MLGA刺激时间与AvBD9 mRNA表达水平的关系 | 第59-60页 |
| · 乳酸杆菌MLGA活菌及其灭活菌与AvBD9 mRNA表达水平的关系 | 第60-61页 |
| · Western blot检测培养上清中AvBD9蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73
页 |
